應(yīng)用表面活性劑及磷脂酶制作豬脫細(xì)胞角膜基質(zhì)的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文應(yīng)用表面活性劑及磷脂酶制作豬脫細(xì)胞角膜基質(zhì)的研究姓名：周楊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：王智崇20090524◇中山大學(xué)博士學(xué)位論文應(yīng)用表面活性劑及磷脂酶制作豬脫細(xì)胞角膜基質(zhì)的研究(TritonX100組)一單獨(dú)使用TritonX100處理角膜片，溶液濃度設(shè)定為01％、025％及05％，作用時(shí)間為6dH寸、12d“時(shí)及24d時(shí)；以不同的濃度及作用時(shí)間進(jìn)行組合，共分為9組；實(shí)驗(yàn)組(SDS組)一室溫卜使用SDS

2、處理角膜，溶液濃度設(shè)為005％、01％及05％，作用時(shí)問64時(shí)、12d時(shí)、24d時(shí)，亦分為9組：實(shí)驗(yàn)網(wǎng)組一根據(jù)對(duì)上述實(shí)驗(yàn)三組結(jié)果的觀察，選擇濃度為0I％SDS在37℃下分別作用29d時(shí)，每l小時(shí)作為1個(gè)觀察點(diǎn)，共分為8組；組織學(xué)檢查顯示以濃度為01％的SDS溶液在37℃處理7d時(shí)后，角膜原有的三維顯微空問結(jié)構(gòu)保留良好，基質(zhì)片內(nèi)無細(xì)胞成分殘留；遂以此處理?xiàng)l件得到的脫細(xì)胞角膜片(SDS弋ACM組)進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)；2脫細(xì)胞角膜基質(zhì)物理學(xué)特性的鑒

3、定：從SDSCACM，ADMCACM，PBS—CACM三組中，每組隨機(jī)抽取相同厚度的12只角膜基質(zhì)片，分別將三組植片固定于紫外一可見光譜儀密閉的樣品倉中，選擇250nm800nm作為觀測(cè)的波長范圍，連續(xù)測(cè)定兩組植片的透光率；每組隨機(jī)抽取24只角膜基質(zhì)，置于50℃烘箱里烘干24小時(shí)，電子天平測(cè)其恒重G，后浸入PBS緩沖液，在角膜片吸水后的不同時(shí)段取出，稱重為G1；吸水率測(cè)量分為二組，每組12只。第一組測(cè)量時(shí)間持續(xù)2小時(shí)，每問隔lO分鐘測(cè)量

4、1次；第二組測(cè)量持續(xù)時(shí)間12小時(shí)，每間隔l小時(shí)測(cè)量1次，計(jì)算吸水率；上述三組角膜片按lcm2試樣表面積加lOmL細(xì)胞培養(yǎng)液的比例在37。C的培養(yǎng)箱內(nèi)浸提24小時(shí)，用MTT法評(píng)價(jià)各組植片對(duì)細(xì)胞生長活性的影響。3脫細(xì)胞基質(zhì)力學(xué)特性的鑒定：模擬正常角膜的結(jié)構(gòu)制作力學(xué)模具，從SDS—CACM，ADM—CACM，PBS。CACM三組和空白組中每組隨機(jī)抽取12只角膜基質(zhì)，通過充氣一破裂實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選擇SDSCACM，PBS—CACM和空白組角膜片每

5、組12只進(jìn)行應(yīng)力一應(yīng)變實(shí)驗(yàn)，將拍攝所得數(shù)據(jù)輸入電腦，測(cè)量并計(jì)算逐漸加壓后角膜中央?yún)^(qū)標(biāo)記范圍內(nèi)的面積變化，計(jì)算在5、15、30、50mmltg壓力差(P’)時(shí)角膜片面模量(E)的變化，分析并比較不同組別角膜植片的應(yīng)力一應(yīng)變關(guān)系的差異。4異種角膜基質(zhì)層問植入術(shù)后透明性的恢復(fù)：成年新西蘭大白兔60只，SDS—CACM組脫細(xì)胞角膜片30只，實(shí)驗(yàn)組30只眼，右眼行角膜基質(zhì)層間異種材料植入手術(shù)，陰性對(duì)照組30只眼，右眼僅行角膜基質(zhì)板層分離術(shù)。異種植