腦缺血疊加寒冷誘導(dǎo)血瘀證表征模型及其生物學(xué)基礎(chǔ)研究.pdf

1、背景： 現(xiàn)有血瘀證(blood stasis syndrome，BSS)動(dòng)物模型以生物化學(xué)和生物物理等改變?yōu)樵u(píng)價(jià)依據(jù)，忽視生物表征所表達(dá)的血瘀病理變化的整體反映狀態(tài)，如舌暗或瘀斑等符合人體血瘀證臨床表現(xiàn)的指標(biāo)．這在一定程度上又制約著血瘀證及其活血化瘀療法研究的深入和臨床應(yīng)用。為此，本課題組提出了證候表征模型概念，并初步建立了寒凝血瘀證候表征模型，但腦缺血疊加寒冷誘導(dǎo)的病證結(jié)合表征模型尚未探討。 目的： 本研究旨在

2、建立腦缺血疊加寒冷誘導(dǎo)血瘀證表征模型，并再此基礎(chǔ)上探索其生物學(xué)基礎(chǔ)． 方法： 采用反復(fù)冰水冷凍法誘導(dǎo)寒凝血瘀證大鼠表征模型；采用大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)、雙側(cè)頸總動(dòng)脈(BCCA)結(jié)扎、單側(cè)頸總動(dòng)脈(UCCA)結(jié)扎3種腦缺血誘導(dǎo)血瘀證大鼠表征模型；在比較三種模型表征基礎(chǔ)上，選擇一種穩(wěn)定性、顯示度和時(shí)間窗都優(yōu)的模型，用于病證結(jié)合造模，即大腦中動(dòng)脈閉塞疊加寒冷誘導(dǎo)血瘀證大鼠表征模型。表征測(cè)量方法有圖像采集分析技術(shù)觀察模型大鼠

3、血瘀證生物表征的變化，并進(jìn)行舌質(zhì)色度值分析，采用吉量通用自動(dòng)活動(dòng)箱和自發(fā)活動(dòng)(開(kāi)場(chǎng))視頻分析系統(tǒng)進(jìn)行大鼠行為學(xué)測(cè)試分析、同時(shí)采用放射免疫分析法測(cè)定血漿TXB2、6-Keto-PGF1a含量、酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)試血清tPA、PAI、sVCAM-1、GMP-140含量、免疫組化法測(cè)定腦組織海馬IL-1、ICAM-1、Integrin β1表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞總面積和積分光密度值和電鏡觀察舌、腦組織微血管的病理變化等，并分析其與血瘀表證證候的相關(guān)性．

4、 結(jié)果： 1.寒凝血瘀證表征模型大鼠舌質(zhì)紫暗，舌下脈絡(luò)增粗增長(zhǎng)，與正常大鼠舌質(zhì)鮮紅潤(rùn)澤、舌下脈絡(luò)清晰有明顯差異(P<0.05)．腦缺血后3、5dMCAO組、BCCA組與正常組大鼠的舌質(zhì)色度值比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；MCAO組腦缺血后3 d大鼠舌下脈絡(luò)顯色長(zhǎng)短分級(jí)計(jì)分均值(1.44±0.08)高于正常組均值(0.56±0.53)，統(tǒng)計(jì)學(xué)有差異(P<0.05)． 2.腦缺血后3 dMCAO組、冰水組與腦缺血

5、疊加寒冷組大鼠的舌質(zhì)色度值與正常組比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；腦缺血后3 d腦缺血疊加冰水組舌質(zhì)色度值為各時(shí)間點(diǎn)最高值(舌質(zhì)色度值60.12±5.154)。各組血液流變學(xué)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，MCAO組、冰水冷凍組、冰水+MCAO組全血及還原黏度、血球壓積、血漿黏度、聚集指數(shù)、變形指數(shù)均較正常組升高，部分時(shí)間點(diǎn)值升高與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01，P<0.05)，其中又以冰水+MCAO組腦缺血后3 d血液黏度、血球壓積、血漿黏

6、度、聚集指數(shù)均為各組最高值，變形指數(shù)為各組最低值。MCAO組、冰水冷凍組、冰水+MCAO組血漿TXB2含量均較正常組升高，部分時(shí)間點(diǎn)值升高與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01，P<0.05)，其中又以冰水+MCAO組腦缺血后3 d血漿TXB2(184.7±97.12)增加最明顯。冰水冷凍組造模后3d血漿6-Keto-PGF1a．含量(147.7±16.32)最低，冰水+MCAO組腦缺血后3d血漿TXB2/6-Keto-PGF1a比值(

7、1.22±0.648)最高，其與正常組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)． 3.腦缺血疊加冰水冷凍組大鼠的生物表征(客觀化指標(biāo)包括舌質(zhì)色度值、舌下脈絡(luò)顯色長(zhǎng)短分級(jí)計(jì)分、大鼠活動(dòng)時(shí)間及活動(dòng)速度)與血液流變學(xué)指標(biāo)、血漿TXB2、6-Keto-PGF1a含量、血清tPA、PAI、sVCAM-1、GMP-140含量、腦組織海馬IL-1、ICAM-1、Integrin β1表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞總面積和積分光密度值均存在相關(guān)性，腦缺血疊加冰水組大鼠

8、舌、腦組織的微血管電鏡病理變化最明顯。 結(jié)論： 大腦中動(dòng)脈閉塞疊加寒冷模型是目前誘導(dǎo)血瘀證表征模型的最佳方法。單純MCAO或單一寒冷刺激所誘導(dǎo)的血瘀證表征模型在穩(wěn)定性、顯示度等方面不及腦缺血疊加寒冷法。血液流變學(xué)，血漿TXB2、6-Keto-PGF1a, 血清tPA、PAI、sVCAM-1、GMP-140，腦組織內(nèi)IL-1、ICAM-1、Integrin β1表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞總面積和積分光密度值以及舌、海馬微血管病理變化與血