腫瘤特異性DCs體外誘導(dǎo)調(diào)節(jié)因素及其生物學(xué)功能研究.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤特異性DCs體外誘導(dǎo)調(diào)節(jié)因素及其生物學(xué)功能研究姓名：朱一蓓申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)光20040401腫瘤特異性Des體外誘導(dǎo)調(diào)節(jié)匿親及其生物學(xué)功能研究中文提要和41BBLmRNA的轉(zhuǎn)錄；ELISA檢測IL2、IL12、IL10的分泌水平；Transwell實驗評價DCs對T細胞的趨化能力：Westernblotting檢測幾2受體Y鏈的表達。結(jié)果：在CD40mAb(5C11)和TNF噸刺激

2、成熟的人MDDC中，CD40、CD80、CD86、HLADR、GL50、PD—L1和PDL2等隨著DCs成熟均逐漸上調(diào)表達，41BB和4，1BBL在抗原負載的DCs上呈現(xiàn)共表達；CD40mAb激發(fā)的DCs中CD25和CD83的表達明顯高于TNF一Ⅱ組且高表達PDL2、中度表達PDL1(尸O05)；CD40mAb激發(fā)的DCs分泌m2和IL12的量明顯高于TNFa組護o0S)；CD40mAb誘導(dǎo)的DCs適度表達CXCR4和CCR7，對T細胞

3、的趨化能力明顯高于TNFd組(尸o05)；DCs表達功能性IL2RY鏈，m2能促進DCs增殖和分泌IFN3。結(jié)論：共刺激分子和趨化因子受體在人MDDC的分化、成熟和功能介導(dǎo)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，CD40信號對人MDDC分化成熟起到至關(guān)重要的作用，DCs表達功能性IL，2聊鏈，IL2及其受體在DCs活化和功能介導(dǎo)中有重要意義。DCs通過41BB／4IBBL共表達的形式可建立激發(fā)DCs和功能介導(dǎo)的新途徑。i關(guān)鍵詞】樹突狀細胞CD40共刺激分

4、子趨化因子受體幾2第二部分腫瘤特異性CTL的體外擴增及功能研究目的：研究DCs聯(lián)合細胞因子體外激發(fā)、擴增的腫瘤特異性CTL的生物學(xué)功能，探討共刺激信號對CTL生物學(xué)功能的影響及其機制。方法：以CD40和TNFa信號激發(fā)的DCs聯(lián)合細胞因子或IL2體外激發(fā)、擴增T細胞，透射電鏡觀察T細胞超微結(jié)構(gòu)，免疫熒光標記和流式細胞儀分析T細胞分化發(fā)育過程中共刺激分子、趨化因子受體及相關(guān)抗原的表達，ELISA法和胞漿內(nèi)細胞因子檢鋇llN定T細胞分泌IL

5、4、IFN吖的水平，3HTdR摻入試驗和”Cr釋放試驗測定DCs體外刺激T細胞增殖和CTL細胞毒殺傷效應(yīng)：Transwell實驗評價T細胞向腫瘤細胞的趨化能力。結(jié)果：DCs激發(fā)的腫瘤特異性T細胞表面共表達B7家族分子CD80、CD86、PDL1和PDL2等，其表達時相和表達水平與CD3聯(lián)合CD28mAb激發(fā)的T細胞不同：PD一1的表達在CD40和TNF程刺激的DCs激發(fā)的T細胞中出現(xiàn)顯著差異，CD40一DCs激發(fā)的CTL，其PD1的表達