腫瘤特異性標志及生物靶向納米制劑的研究.pdf

1、腫瘤特異性標志及生物靶向納米制劑腫瘤特異性標志及生物靶向納米制劑的研究的研究InvestigationofthetumspecificInvestigationofthetumspecificbiomarkersevaluationofbiomarkersevaluationofbiotargeteddrugnanoparticlesbiotargeteddrugnanoparticles一級學科：生物醫(yī)學工程一級學科：生物醫(yī)學工程學科

2、專業(yè)：生物醫(yī)學工程學科專業(yè)：生物醫(yī)學工程作者姓名：牛瑞芳作者姓名：牛瑞芳指導教師：常津教授指導教師：常津教授天津大學精密儀器與光電子工程學院天津大學精密儀器與光電子工程學院二零一二年五月二零一二年五月中文摘要中文摘要腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉移等生物學特性都是多基因參與、多步驟調控的過程。隨著多種蛋白組學技術的發(fā)展，使得以承擔生命活動的基本執(zhí)行體的蛋白質水平的高通量研究成為可能，同樣從蛋白質整體水平進行研究則更有可能來揭示腫瘤的本質，更

3、有可能發(fā)現(xiàn)信號傳導途徑中的關鍵節(jié)點蛋白，找到具有應用價值的靶點蛋白，進而使得個體化診斷和靶向治療得以飛速發(fā)展。本課題首先采用比較蛋白組學的高通量技術，篩選和驗證與乳腺癌耐藥和轉移相關蛋白質標志物。成功建立并優(yōu)化了雙向凝膠電泳分離細胞總蛋白的方法，并對部分存在顯著差異表達的蛋白質進行了MALDITOFMS質譜鑒定，獲得了差異表達蛋白的肽質量指紋圖譜（PMF），通過生物信息學的方法進行檢索，最終識別出11個差異表達蛋白。這些差異表達蛋白分別

4、涉及腫瘤轉移、能量代謝、細胞增殖等，另外還包括一個功能未知蛋白。針對篩選并經過驗證的相關基因Annexina2，應用RNA干擾技術降低人高轉移乳腺癌MDAMB231細胞中Annexina2蛋白的表達水平，獲得3株Annexina2表達水平下降80%100%的穩(wěn)定細胞株。進一步的細胞功能學實驗結果發(fā)現(xiàn)Annexina2表達與高轉移乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲等生物學特性相關，并證實了Annexina2通過與轉錄因子STAT3相互作用影響增

5、殖相關基因（cmyc和cyclinD1）和轉移相關基因（MMP2及MMP9）的表達的作用機制。結果證明Annexina2在腫瘤進展過程中承擔著重要作用，其有可能成為抑制腫瘤增殖和轉移的有效的藥物靶點。同時在課題組前期工作基礎上，我們以腫瘤細胞膜上高表達的葉酸受體作為靶點，通過將聚乳酸羥基乙酸共聚物(poly(lacticcoglycolicacid)，PLGA)微球制備技術同脂質體制備技術相結合，制備了具有核殼結構的納米載體(folic

6、acidmodifiedlipidshellpolymercenanoparticlesFLPNPs)。該載體包括了核結構PLGA、賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽（octadecylquaternizedlysinemodifiedchitosanOQLCS）作為脂質體的殼、靶向制劑（葉酸）和膽固醇。我們的研究數(shù)據(jù)表明，包裹脂質體層后，納米載體的突釋作用得到了明顯的減弱。流式細胞術和共聚焦顯微鏡證實，不僅在葉酸受體高表達的Hela細胞還是在