豚鼠膽囊膽固醇結(jié)石形成過程中小腸動力變化的研究.pdf

1、目的：
　　 隨著人們生活水平的提高,膽囊膽固醇結(jié)石的患者越來越多見,因而,膽囊膽固醇結(jié)石的形成機制逐漸成為國內(nèi)外膽道疾病的研究熱點。過去的研究多集中在脂質(zhì)代謝異常、膽囊吸收與分泌功能障礙、膽囊收縮功能的改變等[1-4]。近年來,腸道運動功能的改變在結(jié)石形成過程中的作用逐漸受到重視,已有的研究顯示,腸道運動功能與膽囊排空有密切的關(guān)系,膽囊排空主要發(fā)生在進食后和消化間期。前者主要受十二指腸壁釋放的膽囊收縮素的影響。消化間期的膽囊收

2、縮與腸道移行運動復(fù)合波(migratingmotorcomplex,MMC)有密切關(guān)系。在健康人,膽囊排空總是發(fā)生在消化間期MMCⅡ相的前半部分,并于MMCⅢ相前達到最大收縮,有很好的對應(yīng)關(guān)系。而膽固醇結(jié)石患者體內(nèi)小腸MMC多出現(xiàn)頻率下降,周期時間延長的現(xiàn)象,膽囊運動也較健康人減弱,這些會導(dǎo)致膽汁淤積,促進結(jié)石形成。對于高膽固醇飲食引起腸道運動功能減退的機制,目前尚不清楚,有人認為,過多的膽固醇整合到腸道平滑肌細胞膜上,改變了膜的流動性

3、及膜受體的功能,影響腸道的收縮和舒張功能。由于腸道慢波電活動與其自身運動有直接的聯(lián)系,而cajal間質(zhì)細胞(interstitialcellsofcajal,ICCs)是胃腸道慢波的起搏細胞,本課題擬從此為切入點,觀察成石過程中小腸電活動與肌張力的變化,為膽固醇結(jié)石成因的研究開拓新的思路。
　　 實驗方法：
　　 一、實驗對象
　　 健康雄性豚鼠100只,體重120-150g,隨機分為2組:對照組(CON組)50

4、只,實驗組(CG)50只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,分別給予普通顆粒飼料和致石飼料,致石周期為6周,飼養(yǎng)期滿后觀察各項指標。
　　 二、標本采集
　　 飼養(yǎng)期滿后麻醉動物,迅速剖腹采集豚鼠小腸,膽囊,膽汁,膽結(jié)石等標本。三、實驗方法和檢測指標
　　 1、致石率評定和紅外光譜結(jié)石定性:解剖顯露豚鼠膽囊,肉眼即可辨別膽囊結(jié)石形成情況,統(tǒng)計結(jié)石形成率。采用紅外光譜溴化鉀壓片法,對結(jié)石成分進行定性分析。
　　 2、膽囊膽

5、汁涂片后于偏振光顯微鏡下觀察。
　　 3、小腸cajal樣間質(zhì)細胞電鏡觀察。
　　 4、制備豚鼠離體小腸肌條,RM-6240HJ型多道生理信號采集處理系統(tǒng)記錄小腸肌條慢波電活動情況,比較對照組與實驗組小腸肌條慢波頻率和振幅的變化。
　　 5、RM-6240HJ型多道生理信號采集處理系統(tǒng)記錄小腸肌條收縮的頻率及張力效應(yīng)值,比較對照組與實驗組小腸肌條收縮的變化。
　　 實驗結(jié)果：
　　 一、豚鼠膽囊膽

6、固醇結(jié)石模型構(gòu)建情況
　　 對照組豚鼠成石率為0%(0/43),實驗組豚鼠成石率為100%(35/35),顯著高于對照組。收集結(jié)石,經(jīng)沖洗、風干,溴化鉀壓片后制成薄片,紅外光譜儀分析其成分證實為膽固醇結(jié)石。
　　 針刺膽囊抽取膽汁涂片,并于偏振光顯微鏡下觀察,對照組膽囊膽汁未見膽固醇結(jié)晶,實驗組膽囊膽汁見典型膽固醇結(jié)晶。
　　 二、豚鼠小腸Cajal樣間質(zhì)細胞(interstitialcajal-likecell

7、s,lCLCs)電鏡觀察
　　 Cajal樣間質(zhì)細胞在電鏡下呈長的,高電子密度的肌樣細胞,胞質(zhì)少,染色質(zhì)分散,基底膜不完整,并且與腸道平滑肌細胞和神經(jīng)纖維束有密切聯(lián)系。
　　 三、豚鼠小腸離體肌條慢波電活動和肌張力的測定結(jié)果
　　 對照組豚鼠小腸離體肌條慢波頻率為17.45±1.50次/min,慢波振幅為0.78±0.17mv,變異系數(shù)分別為:8.62%,21.82%;實驗組豚鼠小腸離體肌條慢波頻率為5.70±1

8、.05次/min,慢波振幅為:0.23±0.31mv,變異系數(shù)分別為:18.34%,31.34%。實驗組數(shù)據(jù)較對照組明顯降低,P值分別為:4.56×10-25,4.00×10-13,均＜0.05;組間比較t值分別為:-27.083,-13.236。
　　 對照組豚鼠小腸離體肌條肌肉收縮頻率為15.85±1.76次/min,張力效應(yīng)值為:1.20±0.11g,變異系數(shù)分別為:11.08%,8.97%;實驗組豚鼠小腸離體肌條肌肉收縮

9、頻率為5.94±1.25次/min,張力效應(yīng)值為:0.78±0.02g,變異系數(shù)為21.01%,2.16%;實驗組數(shù)據(jù)較對照組明顯降低,P值分別為2.41×10-20,1.55×10-13,均＜0.05;組間比較t值分別為:-19.448,-17.307。
　　 結(jié)論：
　　 1、致石飲食誘導(dǎo)豚鼠膽囊膽固醇結(jié)石形成過程中,小腸慢波電活動及肌肉收縮活動明顯減少,小腸動力下降,傳輸功能下降;
　　 2、由于cajal