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文檔簡介
1、枸杞(Lycium barbarum L.)是西北地區(qū)獨特的沙生藥用植物,國內外對枸杞的研究多集中在對其化學成分、抗逆性、抗氧化性及其相關功能產品的研究上,而對其內生真菌研究較少。本研究以寧夏枸杞為研究對象,在摸清其內生真菌多樣性及分布基礎上,以植物病原真菌為靶標菌,篩選高活性拮抗菌株,探究其抑菌、抗生和重寄生等生防潛力;篩選產幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶的菌株探究其產酶條件;通過內生真菌對宿主的侵染定殖,測定內生真菌對枸杞植株生長、
2、抗病和防御酶活性的影響,初步揭示其抗病作用機制。研究結果如下:
1、采用組織分離法對健康枸杞植株進行內生真菌分離,利用形態(tài)特征和rDNA-ITS序列分析對菌株進行鑒定。結果表明:7個寧夏枸杞品種21份樣品中共分離得到內生真菌363株,這些菌株分屬14個屬,其中鏈格孢屬(Alternaria)、梭孢殼屬(Thielavia)和曲霉屬(Aspergillus)為優(yōu)勢屬,分別占分離菌株數的46%、14%和13%。枸杞植株各器官都有內
3、生真菌分布,莖部內生真菌多樣性指數最大,為0.88,且果與莖部的相似性系數最大。內生真菌的分離率和分布頻率說明不同枸杞品種間內生真菌分布存在差異。
2、以枸杞炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和4種常見植物病原真菌為靶標菌,采用皿內對峙和孢子萌發(fā)抑制試驗,測試了121株枸杞內生真菌的拮抗作用。結果表明,菌株NQ3GF1、NQ7GF3和NQ8YF3具有高拮抗活性,其中NQ7GF3的拮抗活性最高
4、,抑菌帶寬度達9.96 mm;菌株NQ3GF1與NQ4YF11具有一定廣譜抗菌活性;菌株NQ3GF1和NQ7GF3無菌絲發(fā)酵液在濃度大于25%時,對枸杞炭疽病菌孢子萌發(fā)有較好的抑制效果,6h后的抑制率均在75%以上;顯微觀察結果表明,菌株NQ3GF1與枸杞炭疽病菌有纏繞、穿透等重寄生現象;并能成功定殖于枸杞根部。經形態(tài)學和分子生物學鑒定,菌株NQ3GF1、NQ7GF3和NQ8YF3分別為細極鏈格孢(Alternaria tenuissi
5、ma)、夏孢枝孢菌(Cladosporium uredinicola)和蓋姆斯炭角菌(Coniolariellagamsii)。
3、采用透明圈法,對6株高活性枸杞拮抗內生真菌菌株進行了產胞外幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶篩選,獲得2株同時產幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶的菌株,其中菌株NQ3GF1產酶活性最高,透明圈半徑達6mm以上。用牛津杯法測定NQ3GF1粗酶液的抑菌效果,發(fā)現2種粗酶液對枸杞炭疽病菌(C.gloeosp
6、orioides Pena.)的抑菌帶寬度均大于10 mm;對菌株NQ3GF1產酶條件的研究結果表明,當碳源(茯苓粉或膠體幾丁質)為0.6%,氮源為蛋白胨,初始pH值在6~8之間,
25℃振蕩培養(yǎng)6d時,培養(yǎng)液中幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶活性較高。
4、利用顯微觀察和回接試驗研究了枸杞內生真菌NQ3GF1在枸杞根莖部的侵染定殖情況及對宿主生長和防御酶活性的影響。結果表明,在枸杞接種24~48 h時菌絲在根表形成網
7、狀結構,72 h后菌絲能穿透表皮侵入至根髓部;濃度低于30%的滅活菌絲發(fā)酵液和濃度低于50%的活菌發(fā)酵液對枸杞組培苗、盆栽苗生長具有促進作用,當濃度高于此濃度時,滅活菌絲及活菌發(fā)酵液均抑制植物的生長;內生真菌NQ3GF1在宿主體內定殖后,提高了枸杞苗的抗病性,對枸杞炭疽病防效達到75.27%,是對照組枸杞苗的3倍;菌株NQ3GF1發(fā)酵液在接種后3~12 d,各濃度處理組PAL酶活性較對照組活性增高,分別在第9d和第6d達到最高,為22.
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