復(fù)發(fā)性尖銳濕疣HPV6 L1基因原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及序列分析.pdf

1、　　目的 構(gòu)建廣州地區(qū)尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者病變組織分離的乳頭瘤病毒晚期基因—L1原核表達(dá)質(zhì)粒,為后續(xù)L1蛋白表達(dá)及研究復(fù)發(fā)患者感染乳頭瘤病毒L1蛋白生物學(xué)特性提供依據(jù)；復(fù)發(fā)患者感染乳頭瘤病毒晚期基因測(cè)序,與原始序列比對(duì),分析其序列變片情況。
　　方法 擴(kuò)增復(fù)發(fā)尖銳濕疣患者病變組織中乳頭瘤病毒早期基因E6、E7之間一段保守序列,經(jīng)Rsa Ⅰ內(nèi)切酶酶切分型鑒定,選取一例感染HPV6型患者皮損,采用PCR技術(shù)擴(kuò)增乳頭瘤病毒晚期基因—L1,經(jīng)

2、酶切、純化后與經(jīng)過(guò)相同酶切的原核表達(dá)載體pQE40質(zhì)粒連接,熱沖擊入感受態(tài)大腸桿菌DH5α,經(jīng)擴(kuò)增后酶切鑒定,陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序,獲得基因組晚期區(qū)L1序列。
　　結(jié)果 四例復(fù)發(fā)患者感染HPV酶切分型結(jié)果顯示,有三例臨床標(biāo)本感染HPV6型,一例感染HPV11型。這提示復(fù)發(fā)患者仍然以6/11感染為主。選取的HPV6型L1基因測(cè)序,發(fā)現(xiàn)其組織來(lái)源與HPV6b型更相近。與GenBank收錄的原型相比,L1基因有7處堿基發(fā)生突變,推導(dǎo)其編碼的

3、氨基酸序列有3處發(fā)生變化。原始序列6062處的A突變?yōu)镚,其編碼的氨基酸由蘇氨酸變?yōu)楸彼幔?684處的核苷酸A突變?yōu)門,其編碼的氨基酸由谷氨酸變?yōu)槔i氨酸；6945處的核苷酸T突變?yōu)镃,其編碼的氨基酸由異亮氨酸變?yōu)樘K氨酸；其余四處為：6598處的A→T,7081處的A→G,7099處的G→A,7243處的C→A,均為同義突變。
　　結(jié)論 成功構(gòu)建了pQE40 HPV6b L1重組質(zhì)粒；復(fù)發(fā)尖銳濕疣患者病變處HPV6 L1基因結(jié)構(gòu)有