版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:研制C3d單抗并標(biāo)記膠體金,利用免疫金層析測試法(immunochromatographic assay)快速、簡便測定輕型、中重型乙型病毒性肝炎患者血漿C3d水平,以判斷其體內(nèi)補(bǔ)體活化情況.方法:1.C3d單克隆抗體的制備用菊糖活化并結(jié)合人新鮮血清中的補(bǔ)體C3b成分,制備菊糖-C3b,以此作為抗原去免疫BALB/c小鼠,制備雜交瘤.以羊抗C3IgG包被酶標(biāo)反應(yīng)板,并從人老化血清中捕獲C3d,以此檢測BALB/c小鼠血清C3d抗體
2、,并篩選陽性雜交瘤.等BALB/c小鼠血清抗C3d陽性時(shí),將其脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合并用HAT培養(yǎng)基作選擇性培養(yǎng),通過檢測雜交瘤上清中分泌C3d單抗情況,篩選陽性雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)擴(kuò)增和多次亞克隆,直至所有單個(gè)細(xì)胞形式的克隆培養(yǎng)上清均呈C3d抗體陽性,可確定為單克隆抗體細(xì)胞系建立.將雜交瘤于BALB/c小鼠腹水中擴(kuò)增,檢測C3d單抗并收集和提純.2.C3d單抗的特異性的分析利用protein G柱親和層析提取單抗IgG和C3d復(fù)合
3、體,一并做SDS-PAGE,根據(jù)分子量,判斷與單抗特異結(jié)合的是否為C3d,間接證明C3d單抗的特異性.3.C3d單抗標(biāo)記膠體金將提線的C3d單抗IgG進(jìn)行低鹽透析,確定與膠體金標(biāo)記的最適量,并在pH約8.0下進(jìn)行標(biāo)記.離心濃縮.4.免疫金層析試條的制備利用提純的羊抗人C3 IgG和羊抗鼠IgG分別在硝酸纖維膜上劃線并封閉,與吸樣材料、玻璃纖維膜(免疫金墊料)、吸水材料組合在一起制備免疫金層析試條.根據(jù)所測定的30例正常人和30例輕型、3
4、0例中重型肝炎患者血漿C3d水平確定試條應(yīng)達(dá)到的檢測限,通過在免疫金中加入不同濃度的未標(biāo)記膠體金(游離)的同克隆C3d單抗來調(diào)整檢測限.用這些檢測限不同的試條分別去測定樣品中的C3d.結(jié)論:1.在沒有C3d純品的情況下,利用菊糖-C3b作為抗原,酶標(biāo)反應(yīng)板包被C3 IgG多抗再捕獲C3d作C3d單抗檢測板,從而制備C3d單抗的方法是切實(shí)可行的.2.用proteinG親和柱提取單抗及其抗原,將該復(fù)合物一并做SDS-PAGE,分析單克隆抗體
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- C3d的免疫負(fù)調(diào)控作用及其可能的機(jī)制.pdf
- 抑制素-C3d DNA疫苗的構(gòu)建及免疫作用.pdf
- C3d分子佐劑核酸疫苗的構(gòu)建與免疫效果研究.pdf
- C3d增強(qiáng)多表位DNA疫苗的體液免疫應(yīng)答.pdf
- C3d分子佐劑增強(qiáng)hCGβDNA避孕疫苗體液免疫效應(yīng)及其機(jī)理研究.pdf
- 促性腺激素抑制激素-C3d DNA疫苗的構(gòu)建及免疫作用.pdf
- 補(bǔ)體C3d分子的桿狀病毒表達(dá)和分子進(jìn)化研究.pdf
- 補(bǔ)體C3d增強(qiáng)偽狂犬病毒gC基因免疫原性的研究.pdf
- 鴨病毒性肝炎C3d新型分子佐劑基因疫苗的研究.pdf
- 分子佐劑C3d增強(qiáng)豬流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的研究.pdf
- 羊補(bǔ)體分子C3d基因的克隆及羊包蟲病基因工程亞單位疫苗的研制.pdf
- 分子佐劑補(bǔ)體C3d融合乙肝核酸疫苗preS-,2-S的重組質(zhì)粒pVAX1-C3d-S2S之構(gòu)建及其免疫預(yù)防效應(yīng)和免疫治療作用的研究.pdf
- 沙門氏菌invH基因亞單位疫苗和C3d分子佐劑核酸疫苗的制備與免疫效果研究.pdf
- C3d對分泌型柯薩奇病毒B組3型VP1 DNA疫苗的免疫增強(qiáng)作用.pdf
- 傳染性法氏囊病病毒VP2與C3d串聯(lián)基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫功能分析.pdf
- 分子佐劑C3d對腸炎沙門氏菌Ⅰ型菌毛主要亞單位FimA免疫原性影響的研究.pdf
- 補(bǔ)體C3d免疫組化染色用于診斷早期膜性腎病和IgA腎病小動(dòng)脈硬化的研究.pdf
- hCGβ-CTP四聚體與C3d片段融合蛋白的表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備.pdf
- 3D-FIESTA-c序列在脊神經(jīng)成像中的初步研究.pdf
- 表C3—3—3d.doc
評論
0/150
提交評論