超濾膜分離在豬血紅蛋白純化工藝中的應(yīng)用研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)的血液資源緊缺，再加上急救外科、地震的發(fā)生等，血液代用品的地位日趨重要。血紅蛋白作為血液代用品的主要原料，其活性和純度與血液代用品的安全性息息相關(guān)。理想的血紅蛋白原料應(yīng)該具有較高純度和濃度且接近紅細(xì)胞中血紅蛋白的天然活性。目前已報(bào)道的研究成果中，分別用不同的方法純化得到了血紅蛋白溶液，但純化后的血紅蛋白活性受到了不同程度的損傷。超濾是一種對(duì)原料活性損傷較小的膜分離技術(shù)手段?；谶@項(xiàng)特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)將超濾技術(shù)引入到血紅蛋白的純化工作

2、中，以期能純化出高純度、和接近天然紅細(xì)胞中血紅蛋白活性的血紅蛋白溶液。
　　 關(guān)于本研究：
　　 目的：建立和優(yōu)化血紅蛋白純化的超濾條件；純化出人工紅細(xì)胞研究所需要的高純度和濃度并具有天然紅細(xì)胞攜氧能力的的豬血紅蛋白溶液。
　　 方法：首先通過低滲法從豬血紅細(xì)胞中提取得到血紅蛋白溶液，然后采用超濾膜分離的方法純化豬血紅蛋白。根據(jù)膜通量與超濾操作壓力和料液溫度的關(guān)系分析確立最佳的超濾純化條件，并在優(yōu)化的超濾條件下純

3、化豬血紅蛋白。并應(yīng)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳法、紫外-可見分光光度法對(duì)純化后的血紅蛋白進(jìn)行了鑒定分析。另外，應(yīng)用血氧分析儀對(duì)超濾后的血紅蛋白溶液進(jìn)行了攜氧能力測(cè)定和P50測(cè)定。
　　 結(jié)果：在血紅蛋白的超濾過程中，膜通量與操作壓力基本呈線性關(guān)系增加，優(yōu)化的超濾條件為：操作壓力0.05Mpa、料液溫度12℃；在此條件下分離純化的豬血紅蛋白，純度達(dá)到了99％以上，濃度較純化前提高了20倍左右。經(jīng)血氧分析儀測(cè)定，

4、經(jīng)超濾純化后的豬血紅蛋白P50為20.42，且具有接近天然紅細(xì)胞的S型攜氧曲線。
　　 結(jié)論：本課題用超濾技術(shù)純化得到的豬血紅蛋白，不僅達(dá)到了一定的濃度和純度標(biāo)準(zhǔn)，而且通過攜氧能力的檢測(cè)，證明對(duì)血紅蛋白的活性損傷較小。本課題超濾純化得到的血紅蛋白為本實(shí)驗(yàn)室血液代用品的進(jìn)一步研究提供了較好的原料。
　　 超濾是一種常見的膜分離技術(shù)，有著無污染、條件溫和、使蛋白變性較少和回收率較高等優(yōu)點(diǎn)。因此，本課題的超濾純化血紅蛋白的方法