血管內(nèi)皮生長因子基因多態(tài)性與肺癌發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:肺癌是發(fā)病率和死亡率增長最快,對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。肺癌己成為全球惡性腫瘤死因的首位。大量研究明確提出:吸煙、職業(yè)暴露、環(huán)境污染等被認(rèn)為是肺癌的危險因素。盡管絕大多數(shù)肺癌的發(fā)生與這些因素相關(guān),但是僅有15％的吸煙者最終發(fā)生肺癌,有不足10％的肺癌患者則從不吸煙。近來,隨著分子生物學(xué)研究水平的不斷進展,肺癌遺傳易感性的影響逐漸被重視。
　　 血管增生是腫瘤的發(fā)生和發(fā)展的重要一步,可以有效促進腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)

2、移。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是已知作用最強的促血管生成因子之一,近來報道提示:在一些腫瘤性疾病如:乳腺癌,胃癌、肺癌、前列腺癌和食管癌等可以檢測到患者血、尿或腫瘤組織內(nèi)VEGF表達量增加。VEGF基因具有高度多態(tài)性,目前至少發(fā)現(xiàn)了30個單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點。本研究旨在探討VEGF基因啟動子區(qū)-2578C/A和+405G/C單核苷酸多態(tài)性(single nu

3、cleotidepolymorphism,SNP)與中國北方漢族人群肺癌(lung cancer)發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。
　　 方法:采用基于醫(yī)院的病例-對照研究方法,采集172例肺癌患者(其中鱗狀細(xì)胞癌62例、腺癌41例、腺棘細(xì)胞癌17例、小細(xì)胞肺癌26例、其他病理類型包括大細(xì)胞癌、印戒細(xì)胞癌、透明細(xì)胞癌、肉瘤樣癌、細(xì)支氣管肺泡癌等26例)和184例健康對照個體的靜脈抗凝血5ml,同時記錄其病史和個人相關(guān)資料。采用蛋白酶K消化-飽和

4、氯化鈉鹽析法于外周血采集一周內(nèi)提取其白細(xì)胞DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析方法和引物介導(dǎo)的限制性聚合酶鏈反應(yīng)(primer-introduced restriction analysis PCR,PIRA-PCR)方法檢測VEGF-2578C/A和+405G/C SN

5、Ps的基因型頻率分布。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS11.5版軟件包(SPSS Company,Chicago,Illinois,USA)進行分析,P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。比較各位點基因型頻率的觀察值與預(yù)期值進行卡方檢驗,并行Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對照組的年齡差異行t檢驗。病例組與對照組的基因型、等位基因型分布比較采用行×列表卡方檢驗。采用EH軟件分析VEGF-2578C/A和+405G/C基因單

6、體型頻率,2LD軟件(1.2 version,Rockefeller University,New York)分析連鎖不平衡狀態(tài)。以非條件Logistic回歸法計算經(jīng)性別、年齡和吸煙狀況校正的相對風(fēng)險度的比值比(odds ratio,OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval,CI)。
　　 結(jié)果:1肺癌組的吸煙者比例(58.1％)明顯高于健康對照組的(42.4％)存在顯著性差異(x2=8.200,P=0.

7、004)。吸煙可顯著增加肺癌發(fā)病風(fēng)險,經(jīng)性別和年齡校正后的OR=2.448,95％CI=1.382～4.337。2健康對照組中的VEGF-2578C/A多態(tài)性位點的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。肺癌患者組VEGF-2578C/A SNP C和A等位基因頻率分別為70.9％、29.1％;健康對照組中等位基因頻率分別為78.5％、21.5％:肺癌組中A等位基因頻率明顯高于對照組,兩組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(x2

8、=5.064,P=0.020)。三種基因型(C/C、C/A、A/A)分布頻率:健康對照組分別為60.9％、35.3％、3.8％;肺癌組的基因型頻率分別為49.4％、43.0％、7.6％。由于A/A基因型頻率較低,遂將C/A與A/A基因型合并。合并后肺癌患者組的C/C、C/A+A/A基因型頻率分別為49.4％、50.6％;健康對照組基因型頻率分別為60.9％、39.1％。兩組間基因型分布有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=4.265,P=0.033)。與

9、C/C基因型相比,攜帶A等位基因(C/A+A/A)的基因型可顯著增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險。經(jīng)性別、年齡和吸煙情況校正后OR=2.019,95％CI=1.290-3.158。根據(jù)個體吸煙狀況進行分層分析發(fā)現(xiàn),與C/C基因型相比,攜帶A等位基因(C/A+A/A)的基因型可顯著增加吸煙人群的發(fā)病風(fēng)險。經(jīng)性別和年齡校正后的OR=2.043,95％CI=1.090-3.827。根據(jù)肺癌病理類型進行分層分析發(fā)現(xiàn),與C/C基因型相比,攜帶A等位基因的基因型

10、(C/A+A/A)明顯增加肺鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險,經(jīng)性別、年齡和吸煙狀況校正后的OR值是2.073;95％CI是1.025-4.191。3健康對照組中的VEGF+405G/C多態(tài)性位點的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。VEGF+405 G/C基因型和等位基因頻率分布在肺癌組與健康對照組之間均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。根據(jù)個體吸煙狀況分層分析發(fā)現(xiàn),與G/G基因型相比,攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/

11、C),可增加吸煙個體肺癌的發(fā)病風(fēng)險,經(jīng)性別和年齡校正后的OR=2.402,95％CI=1.177-4.904。根據(jù)肺癌病理類型進行分層分析發(fā)現(xiàn),與G/G基因型相比,攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C),明顯增加肺鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險,經(jīng)性別、年齡和吸煙狀況校正后的OR值是2.210;95％CI是1.081-4.517。4應(yīng)用2LD軟件對VEGF-2578 C/A與VEGF+405 G/C多態(tài)性位點進行聯(lián)合分析顯示,兩多態(tài)性位點間不存在

12、連鎖不平衡(D'=0.27149)。
　　 結(jié)論:1吸煙可以明顯增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險。2 VEGF-2578C/A單核苷酸多態(tài)性與肺癌發(fā)病風(fēng)險相關(guān),與C/C基因型相比,攜帶A等位基因的基因型(C/A+A/A)可顯著增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險。根據(jù)個體吸煙狀況分層分析發(fā)現(xiàn),其主要與吸煙個體肺癌的發(fā)病風(fēng)險相關(guān),與C/C基因型相比,攜帶A等位基因的基因型(C/A+A/A),明顯增加吸煙個體肺癌的發(fā)病風(fēng)險。根據(jù)病理類型進行分層分析發(fā)現(xiàn),攜帶A等位