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1、Y-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)作為一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì),廣泛地分布于人和動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。GABA受體有GABAA、GABAs和GAB,Ac三種亞型,免疫組織化學(xué)和原位雜交方法研究提示大鼠的消化道中這三種類型的受體都表達(dá)。外源性GABA可以影響消化道的運(yùn)動(dòng)和分泌等功能,這些作用絕大多數(shù)是由腸神經(jīng)叢(entericnervous system,ENS)上的GABA受體介導(dǎo)的。因此可以推測(cè),GABA
2、也是ENS內(nèi)一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。由于動(dòng)物種屬差異和作用部位不同等原因,不同研究組報(bào)導(dǎo)的有關(guān)GABA影響胃腸道活動(dòng)的結(jié)果并不一致。 痢疾是由痢疾桿菌引起的感染性胃腸疾病,可引起急性和重癥腹瀉。腸道炎癥會(huì)誘發(fā)腸神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生可塑性改變,病人出現(xiàn)長(zhǎng)期的腸道運(yùn)動(dòng)感覺和功能紊亂,甚至表現(xiàn)為炎癥后腸易激綜合癥(Post Infectious Irritable Bowel Syndrome,PI-IBS),但機(jī)制不清。作為一種重要
3、的神經(jīng)遞質(zhì),ENS內(nèi)GABA調(diào)節(jié)消化道的功能是否會(huì)受到腸道炎癥的影響未見報(bào)導(dǎo)。本研究采用胃內(nèi)灌注痢疾桿菌的方式制作大鼠痢疾模型,觀察腸道炎癥對(duì)ENS內(nèi)GABA調(diào)節(jié)消化道運(yùn)動(dòng)作用的影響,并初步探討其機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)選用健康雄性Wistar大鼠,胃內(nèi)灌注福氏痢疾桿菌的方式制備痢疾模型。在痢疾后不同時(shí)間犧牲大鼠,制備遠(yuǎn)端結(jié)腸環(huán)形肌肌條,在灌流肌槽中孵育并記錄肌條自發(fā)收縮活動(dòng)。以平滑肌肌條張力變化為指標(biāo),觀察GABA對(duì)結(jié)腸遠(yuǎn)端環(huán)形肌運(yùn)動(dòng)的影
4、響,用Western blot技術(shù)測(cè)定腸炎前后結(jié)腸GABA受體蛋白表達(dá)量的變化。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示,采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以P<0.05為顯著性差異界值。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下: 1. 外源性GABA引起結(jié)腸遠(yuǎn)端環(huán)形肌的收縮增強(qiáng),或者誘發(fā)雙向反應(yīng),即在短暫的舒張后伴隨一明顯的收縮增強(qiáng)。GABA興奮結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的作用在濃度為100μmol/l-10mmol/l間呈明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系,GABA濃度為10μmol
5、/l時(shí)不影響肌條的自發(fā)收縮。 2. GABAA受體激動(dòng)劑muscimol(100 μmol/l)明顯興奮結(jié)腸收縮,結(jié)腸張力在加藥后迅速增高并在1分鐘內(nèi)達(dá)到最高點(diǎn)。GABAB受體激動(dòng)劑baclofen(100 μmol/l)不影響結(jié)腸收縮。 3.GABAA受體拮抗劑bicuculline(10μmol/l)和電壓依賴性Na+通道阻斷劑河豚毒素(tetrodotoxin,TTX,10μmol/L)均完全拮抗GABA對(duì)雄性大鼠
6、結(jié)腸遠(yuǎn)端環(huán)形肌運(yùn)動(dòng)的興奮作用。 4. 用福氏志賀菌灌胃制備大鼠痢疾模型,結(jié)腸組織切片發(fā)現(xiàn)在灌胃后第10天炎癥最強(qiáng)烈,第14天下降,至第21天恢復(fù)正常;反應(yīng)組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)水平的髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性也在第10天達(dá)到最高,21天及其以后恢復(fù)正常。 5. 腸炎后第10天GABA對(duì)結(jié)腸遠(yuǎn)端環(huán)形肌收縮的興奮作用降低70%,且在第14-45天仍然保持低水平。 6. Western blo
7、t發(fā)現(xiàn)在痢疾后第10天,結(jié)腸GABAA Ra1蛋白表達(dá)量明顯下降,第14天及其以后均恢復(fù)正常。結(jié)腸中未檢測(cè)到GABABR1蛋白表達(dá)。 7. 氨甲酰膽堿(carbachol)對(duì)結(jié)腸遠(yuǎn)端環(huán)形肌收縮的興奮作用在腸炎后第32及45天與正常大鼠相比沒有明顯改變。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 1. 外源性GABA通過(guò)ENS內(nèi)GABAA受體興奮大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸的環(huán)形肌收縮。 2. 腸炎后GABA.興奮結(jié)腸遠(yuǎn)端環(huán)形肌收縮的作用受到長(zhǎng)時(shí)間
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