納米羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合BMP再血管化的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】 通過納米羥基磷灰石／殼聚糖(N-HA／CS)復(fù)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMlP)研究復(fù)合人工骨再血管化問題，初步了解該復(fù)合人工骨植入后成骨與血管長入之間的關(guān)系，以及復(fù)合人工骨的孔徑對(duì)再血管化的影響。 【方法】 1、復(fù)合材料的制備 采用共沉淀法獲取納米羥基磷灰石／殼聚糖復(fù)合材料，通過粒子瀝濾法制備納米羥基磷灰石／殼聚糖多孔復(fù)合材料，孔隙率為85％，孔徑為100-500μ；將納米羥基磷灰石／殼聚糖復(fù)合材料與氧化鋅(ZnO)

2、粉末按重量比為8:1的方式混合制備成致密材料。納米羥基磷灰石與殼聚糖的重量百分比為70:30。二種材料共80塊，制備成3mmx3mmx5mm大小塊狀。 2、復(fù)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白 將210mgBMP均分成105mg，分別放入2ml的4mol／l鹽酸胍0.05mol／1 CaCL<,2>的復(fù)合溶液的1號(hào)瓶和2號(hào)瓶中，攪拌溶解，4C°置放24小時(shí)。將30塊多孔的N-HA／CS放入1號(hào)瓶中，將30塊致密的N-HA／CS放入2號(hào)瓶中，在2

3、8 C°的環(huán)境中，放置12h。冷凍干燥，去離子水透析72小時(shí)，凍干，合成N-HA／CS-BMP復(fù)合人工骨。每塊人工骨含BMP3.5mg。共計(jì)60塊。分袋包裝，環(huán)氧乙烷消毒備用。 3、動(dòng)物模型建立20只新西蘭兔，體重2.62±0.17kg，雌雄不限，隨機(jī)分成A組：多孔N-HA/CS-BMP；B組：致密N-HA/CS-BMP；C組：多孔N-HA/CS；D組：致密N-HA/CS。A、B組作為試驗(yàn)組，共15只兔，植入復(fù)合人工骨60塊，C

4、、D組作為對(duì)照組，共5只兔，植入載體材料20塊。采用速眠新II肌肉注射麻醉，在兔的脛骨近端內(nèi)側(cè)取1cm切口，用直徑為3.5mm鉆頭鉆孔，每側(cè)鉆2孔，孔間距為1cm。試驗(yàn)組兔的右側(cè)肢體植入A組，左側(cè)植入B組；對(duì)照組兔的右側(cè)肢體植入C組，左側(cè)植入D組。 4、墨汁灌注術(shù)后4、6、8周在速眠新II的麻醉下，顯露腹主動(dòng)、靜脈，動(dòng)脈端遠(yuǎn)心端插管，37℃墨汁復(fù)合液灌注，靜脈切斷放血。 5、檢測指標(biāo)取出標(biāo)本，行大體觀察、X線檢查、組織學(xué)觀察、

5、I型膠原免疫組化染色、顯微計(jì)算機(jī)圖像采集分析、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。了解各組成骨能力、血管化程度、復(fù)合人工骨的成骨與血管化之間的相互關(guān)系。 【結(jié)果】 1、術(shù)后死亡2只動(dòng)物，2只動(dòng)物的一側(cè)肢體發(fā)生骨折，所有動(dòng)物傷口都于2周左右愈合，沒有動(dòng)物發(fā)生感染。有少量標(biāo)本移位致軟組織內(nèi)，似牙膏樣，看不清多孔結(jié)構(gòu)；少量標(biāo)本取材時(shí)向外流淌，似牙膏樣。 2、X光線檢查：4、6周顯示植入孔明顯，材料與骨之間有密度減低的透光環(huán)，8周材料與骨結(jié)合緊密，透

6、光環(huán)消失。 3、組織學(xué)觀察：4、6周的材料內(nèi)的炎性反應(yīng)較重，主要是白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，8周的材料內(nèi)炎性反應(yīng)減輕；4周材料均勻分布，漂浮著少量羥基磷灰石，似液態(tài)化，看不到多孔結(jié)構(gòu)。8周殼聚糖大部分降解，從而顯現(xiàn)出羥基磷灰石的多孔結(jié)構(gòu)。A組成骨優(yōu)于B、C、D組，P<0.05；A組血管化優(yōu)于B、C組，P<0.05，但B組與D組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組成骨與A組血管化呈直線正相關(guān)關(guān)系。 4、I型膠原免疫組織化學(xué)染色顯示結(jié)果支持顯微計(jì)