伊馬替尼耐藥慢性粒細(xì)胞白血病患者AbI激酶區(qū)點(diǎn)突變的檢測及其臨床意義.pdf

1、目的：(1)探討伊馬替尼(imatinib,IM)耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病(chronicmyeloidleukemia，CML)患者中，Abl酪氨酸激酶區(qū)點(diǎn)突變在耐藥機(jī)制中所占的比例、點(diǎn)突變的類型及其臨床意義；(2)分析伊馬替尼耐藥的CML患者中BCR-ABL融合基因的分布類型及其是否與非IM耐藥的CML患者的BCR-ABL融合基因的分布存在差別。
　　 方法：(1)收集32例IM耐藥的CML患者骨髓或外周血標(biāo)本，其中慢性期(c

2、hronicphase，CP)18例、加速期(acceleratedphase，AP)8例和急變期(blastcrisis，BC)6例：另外收集30例非IM耐藥的CML患者骨髓或外周血標(biāo)本作為對照組；(2)用淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離單個核細(xì)胞，Trizol試劑提取總RNA;(3)cDNA的合成；(4)PCR擴(kuò)增32例IM耐藥患者的BCR-ABL融合基因類型并分析，另外對30例非IM耐藥的CML患者BCR-ABL融合基因類型進(jìn)行

3、對照分析；(4)采用半巢式PCR的方法擴(kuò)增IM耐藥患者Abl激酶區(qū)864bp的堿基片段，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化、雙向測序并與NCBI資料庫比對，行序列同源性分析，以確定突變堿基位點(diǎn)，判斷相應(yīng)氨基酸。
　　 結(jié)果：(1)32例IM耐藥的CML患者中共檢出12例伴Abl激酶區(qū)點(diǎn)突變，占37.5％，點(diǎn)突變類型包括：T315I、Y253H及M351T各2例、M244V、F3111、M388L、G250E、I293T及M290T各1例，其中

4、M290T突變?yōu)槭状伟l(fā)現(xiàn)，根據(jù)CML臨床分期，CP、AP和BC患者點(diǎn)突變的發(fā)生率分別為38.89%、37.5%、33.3%;(2)32例耐藥患者表達(dá)b3a2型融合基因17例，b2a2型14例，b3a2/b2a2共表達(dá)型1例，而其中12例伴Abl激酶區(qū)點(diǎn)突變的患者中b3a2型7例，b2a2型4例，b3a2/b2a2共表達(dá)者1例；對照組30例CML患者中b3a2型融合基因13例，b2a2型5例，b3a2/b2a2共表達(dá)型3例，b2a2/e2