產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌的遺傳轉化及紫杉醇合成途徑相關基因的克隆.pdf_第1頁
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1、上海交通大學博士學位論文產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌的遺傳轉化及紫杉醇合成途徑相關基因的克隆姓名：汪業(yè)春申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：唐克軒20070601歲蓐震磊震摯博士學位論文生真菌發(fā)酵液提取物中檢測到了紫杉醇及其重要前體巴卡亭IⅡ。抗癌細胞活性實驗結果表明，該菌株發(fā)酵液提取物能顯著抑制或殺死肝癌細胞系BEL7402。根據(jù)生理特性和形態(tài)學特點，該菌株被鑒定為雙孢束梗孢菌(Didymostilbesp)，將其命名為DFll

2、0，該菌株不同于國內(nèi)外已報道的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌。2)以本研究組以前分離到的產(chǎn)紫杉醇BT2菌株為研究材料，采用RACE技術，首次成功克隆了3羥基3甲基戊二酰輔酶A還原酶基因(BT2HMGR)的全長cDNA序列及其基因組序列，該基因全長3926bp，含有一個3522bp的開放閱讀框，編碼一個具有1173個氨基酸殘基的蛋白，序列比對結果表明，BT2HMGR基因含有四個外顯子和三個內(nèi)含子；BLASTP分析顯示，該基因編碼的氨基酸與其它真菌的HM

3、GR有較高相似性。Southern雜交表明，該基因在BT2基因組中以單拷貝形式存在。RTPCR分析發(fā)現(xiàn)，BT2HMGR基因的表達受甲基茉莉酸(MeJA)誘導。3)成功建立了利用限制酶介導整合(REMI)技術的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌BT2的遺傳轉化體系及檢測方法，獲得了42個穩(wěn)定轉化子，PCR和Southernblot分析證明外源潮霉素基因已被成功整合到B他基因組中，轉化頻率大約是56個轉化子／微克質(zhì)粒DNA。該系統(tǒng)的建立為今后利用紫杉醇合成途

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