克隆豬與人工授精豬胎盤發(fā)育的比較研究.pdf

1、克隆又稱體細胞核移植(SCNT)，該技術已在多種哺乳動物中成功建立并被逐漸應用。目前，豬的體細胞克隆仍然有很多問題，首先，豬的克隆效率不足1％；其次，超過50%的克隆仔豬在斷奶前死亡。這兩個主要問題嚴重制約著豬克隆技術的發(fā)展。胎兒的宮內生長發(fā)育高度依賴于胎盤的形態(tài)大小和功能。很多研究表明，胎盤發(fā)育缺陷是抑制克隆胚胎生長發(fā)育的主要原因之一。但是克隆動物產后的高死亡率與胎盤異常的相關性研究只在個別克隆哺乳動物中有報道，目前還沒有研究報道胎盤

2、發(fā)育狀況與克隆豬出生后存活率的關系。因此，研究掌握克隆豬胎盤的發(fā)育狀況將對改善或提高豬的克隆效率以及出生后存活率具有重要意義。
　　本研究通過比較克隆豬與人工授精豬（AI）的胎盤相關性狀、組織形態(tài)、基因mRNA及蛋白表達水平，從而探究胎盤發(fā)育狀況與克隆豬產后存活率的關聯性。主要研究結果如下：
　?。?）克隆豬的窩均產仔數明顯低于人工授精豬（4.5頭VS.11.8頭），克隆豬的死胎率和出生后4天內的死亡率分別達到20.7%和5

3、1.7%。
　?。?）出生活的克隆豬與AI豬的仔豬出生重和胎盤發(fā)育相關指標比較顯示，S-LB組的仔豬出生重、胎盤面積、胎盤效率均顯著低于A-LB組，而胎盤重無顯著差異；出生4天的比較分析結果顯示，S-DW4組的仔豬出生重、胎盤重、胎盤面積均顯著低于S-SO4組和A-SO4組，但是S-SO4組和S-DW4組的胎盤效率顯著低于A-SO4組。
　?。?）性狀間相關性分析可知克隆豬出生時和出生4天后的存活率均與仔豬出生重、胎盤重、胎

4、盤面積呈極顯著的正相關，且仔豬出生重與胎盤重、胎盤面積、胎盤效率均呈極顯著的正相關。
　　（4）胎盤組織形態(tài)學檢測表明S-SO4組的胎盤發(fā)育狀況接近于AI豬，但S-DW4組的胎盤組織形態(tài)有明顯的異常，包括微絨毛數量不足、細胞滋養(yǎng)層發(fā)育異常等。臍帶形態(tài)鑒定顯示S-LB組的臍帶異常率顯著高于A-LB組。然而S-SO4組的臍帶異常率與A-SO4組無明顯差異，但顯著低于S-DW4組。
　?。?）mRNA表達及蛋白水平檢測結果表明S-

5、SO4組胎盤的印跡基因和非印跡基因的mRNA表達量基本上與A-SO4組無顯著差異，而S-DW4組胎盤中的這些基因的mRNA表達量出現顯著上調或下調，且蛋白檢測分析顯示S-DW4組的Cu-ZnSOD蛋白的表達異常，暗示這類胎盤容易遭受氧化應激，mRNA表達和蛋白表達失調導致胎盤的形態(tài)異常和功能受損。
　　綜上所述，大量克隆豬出生后死亡很大程度上與仔豬出生重偏低有關，胎盤的形態(tài)異常和功能缺陷是導致克隆豬宮內發(fā)育不良的主要源頭。因此，改