口蹄疫—偽狂犬病二價與口蹄疫—豬細小—偽狂犬病三價基因工程疫苗的研究.pdf

1、口蹄疫、豬細小病毒病與偽狂犬病是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的三種重要傳染病，分別由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus，FMDV)、豬細小病毒(porcineparvovirus，PPV)、偽狂犬病病毒(pseudorabiesvirus，PRV)引起。當前豬細小病毒病和偽狂犬病等豬繁殖障礙性傳染病在我國很多豬場流行，造成大量死胎、流產及豬生產能力下降，危害嚴重?？谔阋邉t是人畜共患的急性、烈性傳染病，由于其傳染性極強，而

2、傳統(tǒng)滅活疫苗在生產使用過程中有滅活不徹底導致病毒逃逸工廠而發(fā)生口蹄疫的風險，因此口蹄疫基因工程疫苗的研究受到高度重視。 偽狂犬病病毒具有不感染人、基因組容量大、重組病毒遺傳穩(wěn)定等特點，適合改造成表達外源基因的活病毒表達載體，以偽狂犬病病毒基因缺失株為表達載體構建基因工程疫苗，將其它病原的保護性抗原基因插入PRV基因缺失疫苗株中，就可構建成二價或多價基因工程疫苗，從而在豬場疫病免疫中起到一針防多病的作用。 1.口蹄疫與偽狂

3、犬病二價基因工程疫苗的研究將口蹄疫病毒衣殼蛋白前體P1-2A基因和蛋白酶3C基因共同插入到重組載體pIECMV中，構建重組偽狂犬病病毒轉移載體pIEP1-2A-3C。采用脂質體介導法將pIEP1-2A-3C與偽狂犬病病毒基因缺失標志疫苗株PRVTK-/gE-/LacZ+基因組共轉染，構建了表達口蹄疫病毒P1-2A和3C基因的重組偽狂犬病病毒TK-/gE-/P1-2A-3C，并用空斑篩選與PCR鑒定的方法純化重組病毒。進行Westernb

4、lot鑒定和測定重組病毒在不同細胞上的增殖滴度，結果表明重組病毒構建正確且外源基因獲得有效表達，其增殖滴度與親本株相比差異不明顯。遺傳穩(wěn)定性和安全性檢測表明重組病毒穩(wěn)定性、安全性良好，重組病毒免疫BALB/c小鼠后用ELISA檢測血清中FMDV抗體，并測定FMDV中和抗體效價，結果表明重組病毒可誘導小鼠產生明顯的免疫反應，從而為偽狂犬病與口蹄疫二價基因工程疫苗的研制應用打下基礎。 2.口蹄疫—豬細小—偽狂犬病三價基因工程疫苗的研

5、究將口蹄疫病毒衣殼蛋白前體P1-2A基因和豬細小病毒VP2基因共同插入到重組載體pIECMV中，構建重組偽狂犬病病毒轉移載體pIEP1-2A-VP2，經PCR和酶切鑒定證實質粒構建正確且兩個表達框為反向插入。采用脂質體介導法將pIEP1-2A-VP2與偽狂犬病病毒基因缺失標志疫苗株PRVTK-/gE-/LacZ+基因組共轉染，構建了共表達口蹄疫病毒P1-2A基因和細小病毒VP2基因的重組偽狂犬病病毒PRVTK-/gE-/P1-2A-VP

6、2，并用空斑篩選與PCR鑒定的方法純化重組病毒。對重組病毒進行Westernblot鑒定，結果表明口蹄疫病毒P1-2A前體與豬細小病毒VP2蛋白均得到了有效表達，測定重組病毒在不同細胞上的增殖滴度，其增殖滴度與親本株相比差異不明顯。安全性檢測表明重組病毒安全性良好，重組病毒免疫BALB/c小鼠后經FMDV、PPV、PRV的ELISA抗體檢測與血清中和效價測定，結果表明重組病毒可誘導小鼠對這三種病毒產生明顯的免疫反應。重組病毒免疫小鼠后進