水楊酸鈉對(duì)大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞外向整流鉀電流及其尾電流的影響.pdf

1、第一部分短時(shí)血清培養(yǎng)與多聚賴氨酸對(duì)耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞活性與貼附性的作用 目的：體外分離大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Spiral Ganglion Neurons，SGN)，探索急性分離后短時(shí)血清培養(yǎng)可提高耳蝸SGN的活性，同時(shí)觀察多聚賴氨酸對(duì)耳蝸SGN的貼附性影響，為采取膜片鉗技術(shù)研究耳蝸SGN 電生理特性提供實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。 方法：采用急性分離的方法獲得耳蝸SGN 后，進(jìn)行短時(shí)間的血清培養(yǎng)，同時(shí)在培養(yǎng)皿的底部加入多聚賴氨酸。分別

2、比較耳蝸SGN 在活性和貼附性上與未進(jìn)行血清培養(yǎng)及未加多聚賴氨酸時(shí)的差異。 結(jié)果：1．急性分離后的耳蝸SGN，短時(shí)血清培養(yǎng)后比不培養(yǎng)的能獲得更好的細(xì)胞狀態(tài)，可以記錄出穩(wěn)定的電流曲線，并且能持續(xù)良好的細(xì)胞活性約5 小時(shí),而不加血清培養(yǎng)的細(xì)胞,良好活性只能持續(xù)約半小時(shí)。2．在培養(yǎng)皿底加用多聚賴氨酸，可明顯提高耳蝸SGN的貼附性。 結(jié)論：急性分離方法得到的耳蝸SGN，通過加血清短時(shí)培養(yǎng)及在培養(yǎng)皿底加多聚賴氨酸，可明顯提高耳蝸S

3、GN的活性及貼附性，增加了細(xì)胞的記錄時(shí)間和封接成功率。從而有利對(duì)耳蝸SGN 做進(jìn)一步電生理學(xué)的研究。 第二部分水楊酸鈉對(duì)大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞外向延遲整流鉀電流及其尾電流的影響 目的：記錄水楊酸鈉作用下，急性分離新生大鼠耳蝸SGN 延遲整流鉀通道電流及其尾電流的電流曲線。分析水楊酸鈉(Sodium Salicylate)對(duì)耳蝸SGN 鉀電流及其尾電流的影響，并初步探討其耳毒性機(jī)制。 方法：采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄

4、耳蝸SGN 外向延遲整流鉀電流及其尾電流曲線。同時(shí)記錄水楊酸鈉作用下，此二電流的變化。 結(jié)果：Protocol 設(shè)置鉗制電壓為-60mV，刺激電壓從-80 mV～﹢60mV 逐漸去極化，階躍電壓為﹢10 mV，持續(xù)時(shí)間為500ms?？稍诙丼GN 上記錄到外向整流鉀電流，該電流對(duì)4-AP 敏感，具有延遲整流特性；在細(xì)胞外液中加入1mmol/L 水楊酸鈉，能明顯抑制耳蝸SGN 延遲整流鉀電流。﹢50mV的去極化電壓刺激后引出的最大

5、穩(wěn)態(tài)電流幅值減少了46.3±2％；水楊酸鈉對(duì)此電流的抑制作用與細(xì)胞外液中水楊酸鈉的濃度呈劑量呈正相關(guān)，即水楊酸鈉濃度越大，對(duì)電流的抑制作用越大；外液洗脫后耳蝸SGN外向延遲整流鉀電流可基本恢復(fù)正常。另外，將Protocol 設(shè)置為先加預(yù)刺激-65mV～﹢40mV,緊接給予去極化刺激，-40mV～﹢80mV，可記錄出延遲整流鉀電流后的尾電流曲線。加用水楊酸鈉作用后，水楊酸鈉可降低尾電流峰值，并加速尾電流的失活。 結(jié)論：水楊酸鈉可抑