NOX-100有關物質及NOK檢驗方法的研究.pdf

1、NOX-100是北京協(xié)和醫(yī)藥研究所和美國某醫(yī)藥公司共同開發(fā)的新一代心腦血管藥物，為世界首創(chuàng)，因目前各項研究工作均在研發(fā)階段，其相關內容目前國內外均無報道，目前所作的一系列研究工作只是根據(jù)美國方面提供的一小部分試驗數(shù)據(jù)可供參考，所以對這一領域的探索和研究就變得十分重要，它將推動我國心腦血管領域藥物的發(fā)展。本文主要對試制產(chǎn)品的純度和有關物質等方面進行研究，為進一步制定原料藥的質量標準及以后的相關制劑的質量標準，對于全面控制藥品的質量，具有重

2、要的現(xiàn)實意義。 目的：對NOX-100的有關物質進行研究，為以后制定原料藥及相關制劑的質量標準奠定基礎。 方法：1 NOX-100有關物質高效液相色譜方法的建立： 1.1選擇合適的色譜柱。1.2考察不同的流動相系統(tǒng)，確定最佳的流動相系統(tǒng)。1.3根據(jù)NOX-100及NOK的紫外吸收圖譜，確定檢測波長。1.4確定有關物質檢查的色譜條件。1.5專屬性試驗：將供試品經(jīng)高溫、高濕、氧化、酸、堿破壞性試驗后，考察在擬定的色

3、譜條件下的樣品與其降解產(chǎn)物的分離情況。1.6有關物質分析方法考察：進行穩(wěn)定性試驗，確定最小檢出量。 2 NOK檢測方法的建立：根據(jù)NOK的結構特點，用示差折光檢測器檢測樣品中NOK的含量，并用蒸發(fā)光散射檢測器對試驗進行比對性試驗。 2.1示差折光檢測器： 2.1.1確定NOK檢測的色譜條件。 2.1.2專屬性試驗：將供試品經(jīng)高溫、高濕、氧化、酸、堿破壞性試驗后，考察在擬定的色譜條件下的樣品與其降解產(chǎn)物的

4、分離情況。 2.1.3有關物質分析方法考察：進行穩(wěn)定性試驗，確定最小檢出量。 2.1.4考察國內生產(chǎn)的NOX-100和國外生產(chǎn)的NOX-100的穩(wěn)定性。 2.1.5考察三種不同的溶劑(流動相、甲醇、N-N-二甲基甲酰胺)不同溶劑溶解樣品后的樣品的穩(wěn)定性。 2.2蒸發(fā)光散射檢測器： 2.2.1確定色譜條件。 2.2.2專屬性試驗：將供試品經(jīng)高溫、高濕、氧化、酸、堿破壞性試驗后，考察在擬定的色

5、譜條件下的樣品與其降解產(chǎn)物的分離情況。 2.2.3有關物質分析方法考察：確定最小檢出量。 結果： 1 N0x-100有關物質高效液相色譜方法的建立： 1.1選擇Di鋤onsal C18色譜柱(200×4.6mm，5μm)。 1.2考察5種流動相系統(tǒng)，最終確定的流動相為：甲醇-0.01mol/L磷酸溶液(5:95)(用三乙胺調節(jié)pH值為7.1)。1.3 NOX-100在255nm和284nm的波

6、長處有最大吸收，在228nm和270nm的波長處有最小吸收，NOK幾乎無吸收。經(jīng)考察，在255nm和284nm的波長處，雜質檢出的靈敏度低，在末端區(qū)，雜質檢出的靈敏度增大，為有效的檢出雜質，因而選擇215nm為檢測波長。 1.4確定色譜條件：色譜柱為Di鋤onsal C18色譜柱(200×4.6mm，5μm)；流動相為甲醇一0.01mol/L磷酸溶液(5:95)(用三乙胺調節(jié)pH值為7.1)；檢測波長為215nm。1.5專屬性

7、試驗：NOX-100 NOX-100在光照和高溫下比較穩(wěn)定，沒有明顯的雜質生成。在酸、堿、氧化條件下，樣品被不同程度的破壞，破壞所得到的雜質與主成分峰分離良好。1.6有關物質分析方法考察：用流動相配置的NOX-100溶液放置不穩(wěn)定，在短時間內發(fā)生降解，1g c與t為線性關系，降解為一級反應。最小檢出量為15ng。 2 NOK檢測方法的建立：2.1示差折光檢測器：2.1.1采用Diamonsil C18色譜柱(200mm×4.6

8、mm，5 μm)；流動相：甲醇一O.01mol/L磷酸溶液(5：95)(用三乙胺調節(jié)pH為7.1)；流速1.Oml/min；采用示差折光檢測器；進樣量為20 μl。2.1.2NOX-100在光照和高溫下比較穩(wěn)定，沒有明顯的雜質生成。在酸、堿、氧化條件下，樣品被不同程度的破壞，破壞所得到的雜質與主成分峰分離良好，在高溫、強光、堿破壞、氧化條件下，NOK與其它雜質也能基本分離。2.1.3 NOX-100的檢出限為400ng。2.1.4國外生

9、產(chǎn)的NOX-100和國內生產(chǎn)的NOX-100具有基本相同的穩(wěn)定性。NOK在該條件下24小時內穩(wěn)定。2.1.5取NOX-100，分別用水、甲醇、N-N-二甲基甲酰胺制成適宜的溶液，結果表明在三種不同的溶劑條件下NOK的濃度均約為10％，與用流動相溶解樣品的測定結果基本一致，從上述結果可以認為，樣品中含有約10％的NOK。2.2蒸發(fā)光散射檢測器：2.2.1采用Di鋤0nsil C18色譜柱(200mm×4.6mm，5 μm)；流動相：甲醇-

10、0.01mol/L醋酸溶液(5：95)(用三乙胺調節(jié)pH為7.1)；采用蒸發(fā)光散射檢測器，溫度115℃，氮氣流速為3.7L/min，撞擊器關，靈敏度為4，進樣量為20 μl。2.2.2 NOX-100在光照和高溫下比較穩(wěn)定，沒有明顯的雜質生成。在酸、堿、氧化條件下，樣品被不同程度的破壞，破壞所得到的雜質與主成分峰分離良好，在高溫、強光、堿破壞、氧化條件下，NOK與其它雜質也能基本分離。2.2.3 NOK的檢出限為500ng。