不同寄生蜂寄生后小菜蛾精巢mRNA的表達(dá)差異.pdf

1、本文以蔬菜重要害蟲——小菜蛾P(guān)lutellaxylastella(Linnaeus)及其優(yōu)勢(shì)種天敵菜蛾盤絨繭蜂Cotesiaplutella、半閉彎尾姬蜂Diadegmasemiclausum寄生體系為研究對(duì)象，利用近年發(fā)展起來(lái)的基因篩選方法，通過(guò)比較正常小菜蛾精巢與被寄生小菜蛾精巢之間基因表達(dá)的差異，分離并克隆寄生蜂抑制小菜蛾精巢的相關(guān)基因，在分子水平揭示不同體系中2種PDV對(duì)相同寄主的生理調(diào)控機(jī)制，為明確兩類寄生蜂病毒(Bracov

2、irus和Ichnovirus)在同一寄主體內(nèi)表達(dá)方式和調(diào)控寄主的作用途徑提供依據(jù)。 本試驗(yàn)以正常小菜蛾精巢和被兩種不同寄生蜂寄生過(guò)的小菜蛾精巢為研究對(duì)象，提取組織總RNA，利用mRNA差異顯示(differentialdisplayPCR，DDRT-PCR)的技術(shù)，以隨機(jī)引物1～8與錨定引物T11M(M為A，C或G)配合，PCR擴(kuò)增cDNA后，1％的瓊脂糖凝膠電泳，篩選PDV特異性表達(dá)的cDNA片斷。并對(duì)篩選出來(lái)的cDNA片斷

3、進(jìn)行二次PCR、純化、克隆、測(cè)序、序列分析和設(shè)計(jì)引物驗(yàn)證等實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果表明，經(jīng)差異擴(kuò)增與電泳后，可見(jiàn)十余條差異條帶，將這些差異條帶進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，回收純化，并與PTl8-T載體進(jìn)行連接，經(jīng)藍(lán)白斑篩選后進(jìn)行測(cè)序，通過(guò)GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行了序列的同源性比較，發(fā)現(xiàn)除一條cDNA片斷序列外，其余所有的序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列比較，沒(méi)有同源序列，而那條比對(duì)上的序列與一種植物的序列有100％的同源性，疑為被污染。根據(jù)序列的cDNA片斷設(shè)計(jì)