12421.產(chǎn)β甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌的改造及發(fā)酵條件優(yōu)化

1、中圖分類號(hào)Q墨!墨UDC663碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級(jí)10533公開產(chǎn)p一甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌的改造及發(fā)酵條件優(yōu)化ReconstructionandOptimizationofFermentationConditionsofRecombinantPichiapastorisProducing13mannanase作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：王冶生物學(xué)生物工程資源加工與生物工程學(xué)院周洪波教授答辯委員會(huì)主席中

2、南大學(xué)2014年5月碩士學(xué)位論文摘要產(chǎn)p甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌的改造及發(fā)酵條件優(yōu)化摘要：p1，4一D一甘露聚糖ig疊s(endo1，4Dmannanase，EC32178)是一種廣泛應(yīng)用于飼料和食品等行業(yè)中的半纖維素水解酶，具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究將組成型產(chǎn)D甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌中的儀factor信號(hào)肽替換成五種新信號(hào)肽(W1、MF4I、INUlA、apre、HFBI)。對(duì)比伐factor信號(hào)肽，Wl、MF4I、ctpre、HFB

3、I信號(hào)肽改造菌株的相對(duì)酶活分別達(dá)到235％、2035％、797％和1203％，INUlA無(wú)胞外D甘露聚糖酶活性。通過(guò)RTPCR對(duì)p甘露聚糖酶基因拷貝數(shù)進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果表明0【factor和MF4I兩種重組子的MAN活力均于4個(gè)拷貝數(shù)時(shí)達(dá)到最大。替換MF4I信號(hào)肽的重組子在16個(gè)MAN基因拷貝數(shù)的水平上對(duì)比u—factor信號(hào)肽的重組子，提高的MAN活力分別達(dá)到6630U／m1、9056U／ml、13337U／ml、17397U／ml、10

4、292U／ml、10226U／fml，相對(duì)酶活分別達(dá)到5120％、2090％、1053％、1002％、997％、1052％。4個(gè)拷貝數(shù)的MF4I重組子MAN活力相對(duì)最大，可以達(dá)到3475刪。選用SⅧ1168作為表達(dá)宿主的重組子的平均酶活只能達(dá)到X33宿主型的627％641％。而將pPICZaMAN質(zhì)粒中的Qfactor進(jìn)行MF4I信號(hào)肽改造，重新構(gòu)建得到的誘導(dǎo)型pAOXlMF4I一此刪基因工程菌的酶活可以達(dá)到原來(lái)組成型pGAPZMF41

5、A刪Ⅳ基因工程菌中酶活最高水平的23倍，將其用于下一步高密度發(fā)酵。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)摸索發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基氮源和碳源分別為279／L的玉米漿干粉和20g／L的食品級(jí)葡萄糖，并在誘導(dǎo)流加培養(yǎng)基中新添加2g／L硫酸銨和O5g／L油酸。綜合信號(hào)肽和啟動(dòng)子改造優(yōu)化后的產(chǎn)B甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌經(jīng)5L發(fā)酵罐高密度發(fā)酵后，產(chǎn)出的D。甘露聚糖酶最高活力從搖瓶的17335U／ml提高至6890U／ml，總體提高幅度達(dá)到397倍。關(guān)鍵詞：p甘露聚糖酶；畢赤酵母；