利用組織培養(yǎng)誘導(dǎo)羅漢果同源四倍體.pdf

1、本試驗以目前栽培最廣泛的青皮果品種的無菌實生苗和試管苗為材料,采用組織培養(yǎng)和秋水仙素誘變相結(jié)合的方法誘導(dǎo)羅漢果同源四倍體。結(jié)果表明,秋水仙素誘導(dǎo)羅漢果四倍體的直接效果是形成嵌合體。誘導(dǎo)材料通過頂芽切割和叢生芽技術(shù)誘導(dǎo)再生苗,可分離獲得同源四倍體植株(2n=4x=56)。在整體植株水平上的誘導(dǎo)中,分別用0.1％、0.2%、0.4%秋水仙素溶液點滴無菌實生苗的生長點,每天1滴,連續(xù)處理4天,濃度為0.1%時處理無效,0.2%-0.4%為有效

2、濃度,誘導(dǎo)效果較好,誘變率分別為55%和75%。在秋水仙素溶液中添加0.3%瓊脂,配制成半固體狀的瓊脂制劑再作同樣處理,有促進誘導(dǎo)的作用。0.1%-0.4%均為有效濃度,用0.1%秋水仙素瓊脂制劑處理實生苗生長點4次,誘變率達60%;0.2%處理4次或0.4%處理2次,誘導(dǎo)效果較好,誘變率分別為80%和90%。在莖尖離體誘導(dǎo)中,離體莖尖經(jīng)預(yù)培養(yǎng)3天后分用含有100mg/L、300mg/L、500mg/L秋水仙素的液體培養(yǎng)基振蕩處理3、5

3、、7、10天,再切取頂端5mm培養(yǎng),誘導(dǎo)再生植株。結(jié)果表明,實生苗離體莖尖分別用100mg/L處理10天、300mg/L處理7天、500mg/L處理3天或5天,誘導(dǎo)效果較好,誘變率為80%-100%。試管苗莖尖處理后直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng),易產(chǎn)生回復(fù)突變,難以獲得四倍體植株。但處理后通過切取較小的微莖尖誘導(dǎo)叢生芽,成苗后剪除二倍體枝條,促使變異芽的生長,可明顯提高誘變率。試驗結(jié)果表明,莖尖用300mg/L處理10天、500mg/L處

4、理7天或10天后,再切取長0.5-1.2mm的微莖尖誘導(dǎo)叢生芽,效果較好,誘變率分別為60%、66.7%和73.3%。在嵌合體的純化和穩(wěn)定中,接種在MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.1mg/L的分化培養(yǎng)基中的葉組織,可分化形成大量不定芽,不定芽的分化頻率達100%。成苗后經(jīng)鑒定可分離得到同質(zhì)多倍體,多次繼代無分離現(xiàn)象發(fā)生。將羅漢果同源四倍體切段,接種在6-BA0.3-0.5mg/L+NAA0.02mg/L的培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng),增殖效

5、果好,增殖系數(shù)約為3.0/月。羅漢果同源四倍體試管苗的枝條粗壯,葉片增厚、變寬,葉基閉合,葉色深綠;葉片表皮毛變粗、變長,清晰可見;氣孔增大,氣孔密度比二倍體小,氣孔保衛(wèi)細胞增長,保衛(wèi)細胞內(nèi)葉綠體粒數(shù)增多。試管苗的形態(tài)特征可作為羅漢果多倍體形態(tài)學(xué)鑒定的可靠指標。本文還對同源四倍體植株的形態(tài)特征和生育特性進行了初步研究,為羅漢果同源四倍體的利用提供了理論依據(jù)。田間觀察發(fā)現(xiàn),羅漢果同源四倍體植株與二倍體相比,部分器官表現(xiàn)出巨大性:新梢粗壯;