蚯蚓糞中拮抗菌的發(fā)酵條件優(yōu)化及其在防治植物病害中的應(yīng)用.pdf

1、該研究是國(guó)家863項(xiàng)目"農(nóng)業(yè)、畜禽廢棄物資源的高質(zhì)化產(chǎn)品研制和開(kāi)發(fā)"課題(2001AA246092)和國(guó)家十五科技攻關(guān)課題"利用秸稈畜禽糞便開(kāi)發(fā)生物有機(jī)肥技術(shù)研究"(2002BA516AD3)中的部分內(nèi)容.以蚯蚓養(yǎng)殖為基礎(chǔ),明確蚯蚓對(duì)畜禽糞便等有機(jī)廢棄物的生態(tài)處理作用,側(cè)重于對(duì)蚯蚓處理有機(jī)廢棄物后的產(chǎn)物進(jìn)行綜合的資源化利用,研究開(kāi)發(fā)蚯蚓系列產(chǎn)品.(1)在該研究中,采用培養(yǎng)皿生物測(cè)定、盆栽試驗(yàn)確定了蚯蚓糞中抑菌物質(zhì)的存在,并對(duì)部分植物病害

2、有抑制作用;蚯蚓糞與病土混合后其中的微生物區(qū)系的變化情況;單因素設(shè)計(jì)、多因素正交設(shè)計(jì)對(duì)分離出的兩株拮抗菌的發(fā)酵培養(yǎng)基,得出球孢鏈霉菌發(fā)酵(Streptomyces globisporus)培養(yǎng)基為每1000ml培養(yǎng)基中山梨醇10g、酵母膏5g、牛肉膏5g、CaCO<,3>5g、MgSO<,4> 5g、NaCl 0.5g、FeSO<,4>0.01g,丁香苷鏈霉菌(Streptomyces syringini)培養(yǎng)基為每1000ml培養(yǎng)基中

3、葡萄糖30g、淀粉30g、蛋白胨5g、KNO<,3>0.4g、CaCO<,3>5g、MgSO<,4>0.5g、NaCl0.5g、FeSO<,4>0.01g.(2)單因素試驗(yàn)進(jìn)行培養(yǎng)條件優(yōu)化,確定較為高效的培養(yǎng)條件,對(duì)球孢鏈霉菌(Streptomyces globisporus):發(fā)酵過(guò)程保持的最適溫度為30℃,種齡為36h,初始pH值為7.5,搖床轉(zhuǎn)速為150r/min,發(fā)酵時(shí)間為36-48h,接種量為10﹪;對(duì)丁香苷鏈霉菌(Strep

4、tomyces syringini):發(fā)酵過(guò)程保持的最適溫度為30℃,種齡為48h,初始pH值為7.0,搖床轉(zhuǎn)速為150r/min,發(fā)酵時(shí)間為36-48h,接種量為15﹪.(3)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行再次優(yōu)化,對(duì)其中部分原料以成本較低的玉米粉和黃豆餅粉進(jìn)行替代,對(duì)于球孢鏈霉菌,以玉米粉和黃豆餅粉不同比例取代山梨醇和牛肉膏,采用抑菌活性最強(qiáng)的處理水平,玉米粉與黃豆餅粉質(zhì)量比為15/5,得到的抑菌結(jié)果顯著小于原培養(yǎng)基結(jié)果.對(duì)于丁香苷鏈霉菌,原培養(yǎng)基中

5、的淀粉和蛋白胨被玉米粉和黃豆餅粉以不同比例替代,并且降低葡萄糖含量,采用抑菌活性最強(qiáng)的處理水平,玉米粉與黃豆餅粉質(zhì)量比為20/10,得到了與原培養(yǎng)基相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果.發(fā)酵罐培養(yǎng)與搖瓶培養(yǎng)作對(duì)照試驗(yàn),初步探索了在進(jìn)行大量生產(chǎn)時(shí)的影響因素.(4)對(duì)影響拮抗菌發(fā)酵液抑菌活性的因素進(jìn)行研究,試驗(yàn)結(jié)果顯示,在高溫、紫外照射以及在4℃冰箱內(nèi)保存,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),發(fā)酵液抑菌活性出現(xiàn)不同程度的下降.進(jìn)行不同倍數(shù)的濃度稀釋,球孢鏈霉菌發(fā)酵液稀釋到超過(guò)130倍,