植物病原真菌拮抗放線菌的篩選及其發(fā)酵條件研究.pdf

1、本文為了適應(yīng)當(dāng)前防治植物病害的發(fā)展方向，開發(fā)高效、低毒的農(nóng)用抗生素，從遼寧省沈陽(yáng)市、大連市及吉林省四平市等地區(qū)采集土樣20份分離出放線菌，從所分離的放線菌中尋找具有高效抗真菌活性的農(nóng)用抗生素，并對(duì)其菌株的分類地位、發(fā)酵條件優(yōu)化、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定等方面進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，為今后的抗植物病原真菌病害的藥劑開發(fā)提供實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和理論依據(jù)。 1、通過(guò)廣泛篩選，獲得了目的生防菌株YZ5。利用稀釋分離法從遼寧省8個(gè)地區(qū)及吉林省四平市20份樣品的

2、土壤中共分離到各種放線菌菌株156份，采用活體平板測(cè)定法共獲得對(duì)植物病原真菌具有拈抗作用的放線菌菌株14株：采用杯碟法測(cè)定篩選的各菌株發(fā)酵液抑菌活性，其中發(fā)酵液抑菌圈直徑超過(guò)15mm的菌株有4株。將這4株菌株進(jìn)行了進(jìn)一步的驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明，菌株YZ5無(wú)論是活體還是其發(fā)酵液對(duì)7種供試病原菌均表現(xiàn)較強(qiáng)的抑菌效果，發(fā)酵濾液稀釋10倍后對(duì)番茄葉霉病菌的抑制率達(dá)81.8％。 2、利用傳統(tǒng)分類法明確了菌株YZ5的分類地位。通過(guò)對(duì)菌株YZ5

3、的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特性進(jìn)行研究，推測(cè)YZ5屬于金色類群中的龜裂鏈霉菌(Streptomyces rimosus)的近源變種。 3、研究明確了菌株YZ5的最佳發(fā)酵條件，為YZ菌素進(jìn)入中試階段奠定了良好的基礎(chǔ)。通過(guò)單因子試驗(yàn)，菌株YZ5利用碳源產(chǎn)抗生素從高到低依次為蔗糖>葡萄糖>淀粉>麥芽糖>乳糖；利用氮源產(chǎn)抗生素以玉米粉和黃豆粉為最好，其它依次為蛋白胨、酵母粉、(NH4)2SO4、氨水。通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)菌株YZ5發(fā)

4、酵條件的相關(guān)方程進(jìn)行回歸分析，其發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為蔗糖7.93％，玉米粉2.23％，(NH4)2SO40.233％，CaCO3 0.442％，NaCl 0.225％。選用最優(yōu)化的培養(yǎng)基配方，菌株YZ5的最佳發(fā)酵條件為28℃，150r/min，20％的接種量，起始pH值為7，發(fā)酵培養(yǎng)120h，菌株YZ5產(chǎn)素最多。YZ菌素整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中，總糖、總氮的含量逐漸減少。 4、采用Doskochilova溶劑系統(tǒng)、pH紙層析和紙電泳，分