姜瘟病原菌拮抗放線菌SR-11菌株誘變選育及固體發(fā)酵可行性研究.pdf

1、姜瘟是由青枯假單胞菌(Ralstoia solanacearum Smith)引起的一種分布廣泛的毀滅性病害。目前大多采用各種化學殺菌的方法防治，但效果不明顯，很難從根本上根除姜瘟的發(fā)生。化學殺菌劑的使用，導致生姜中有毒、有害化學物質殘留增加，影響食物安全，使產(chǎn)品進入國際市場受阻。隨著化學肥料的大量使用和土壤復種指數(shù)的提高，再加之目前未能找到理想的防治方法，使得近年來姜瘟發(fā)生普遍，危害嚴重。生物防治因其無毒、副作用，將是防治的有效途徑。

2、因此，本研究對從姜田土壤中分離出來的一株對姜青枯假單孢菌有較強抑制作用的拮抗鏈霉菌SR-11菌株進行了誘變選育研究以及對正變株SR-9菌株進行了固體發(fā)酵的可行性研究。 SR-11在菌絲培養(yǎng)液中的對數(shù)生長期為50～55h。培養(yǎng)基中加入0.5％的甘氨酸和4％的蔗糖既可保證形成一定量的菌絲，又可使菌絲的分散程度較好，并可提高菌絲對溶菌酶的敏感度，有利于原生質體的釋放；對照生長后期的菌絲體形成原生質體的速度與初期、靜止期差別不顯著。在3

3、2℃水浴90min條件下，SR-11最佳溶菌酶濃度為2mg/mL。SR-11原生質體經(jīng)紫外線處理1min后再用亞硝基胍處理，得到一株生物活性提高68.42％的正變株9＃菌株，其傳代穩(wěn)定性研究表明，SR-9菌株經(jīng)過7代選育，其穩(wěn)定性好。 在SR-9菌株固體發(fā)酵的可行性研究中，對該菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)條件下所產(chǎn)活性物質對姜青枯假單孢菌的抑菌活性及其抗菌譜進行了研究。試驗結果表明，鏈霉菌SR-9菌株經(jīng)固體發(fā)酵培養(yǎng)，所產(chǎn)活性物質對姜青枯假單

4、孢菌表現(xiàn)出強的抑菌活性，對革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌以及多種病原真菌均有較強的抑制作用；在對固、液體發(fā)酵培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的活性物質的比較研究中發(fā)現(xiàn)，后者對姜青枯假單孢菌的抑菌活性稍強，但無明顯變化，在抗菌譜方面也無明顯變化。對SR-9菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)所產(chǎn)活性物質進行了溫度、酸堿度和酶三個方面的穩(wěn)定性試驗，在37℃～100℃，pH3.0～pH11.0處理10min以及胰蛋白酶和蛋白酶K處理1h后，對青枯假單孢菌的抑菌活性不變，在100℃