頡頏放線菌XA-1菌株的篩選、鑒定及其發(fā)酵條件研究.pdf

1、本文針對(duì)植物真菌病害分離篩選出一株頡頏放線菌XA-1。從菌種的篩選、鑒定、繁殖培養(yǎng)基的篩選及搖瓶發(fā)酵條件等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，結(jié)果如下：1.通過(guò)廣泛篩選獲得了生防放線菌菌株XA-1。 采用稀釋分離法，以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為分離培養(yǎng)基，從遼寧地區(qū)不同土壤中分離獲得放線菌120株；以番茄葉霉病菌(Fulviafulva)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichumcapsici)、葡萄白腐病菌(Coniothyriumdiplodiel

2、la)、煙草赤星病菌(Alternariaalternata)、小麥赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)等25種植物病原真菌為供試菌，采用活體平板測(cè)定法，共獲得對(duì)上述病原真菌具有頡頏作用的放線菌9株；采用杯碟法測(cè)定篩選出的9個(gè)菌株發(fā)酵液的抑菌活性，從中篩選出抑菌作用較理想的放線菌1株，編號(hào)為XA-1；對(duì)該目的生防菌株的抗菌譜進(jìn)行研究，采用菌株活體(抑菌圈法、菌落生長(zhǎng)法

3、)和發(fā)酵液(杯碟法、生長(zhǎng)速率法)分別測(cè)定其對(duì)上述病原真菌的抑菌效果。測(cè)定結(jié)果表明：頡頏菌株XA-1無(wú)論其活體還是其發(fā)酵液，對(duì)供試的25種病原真菌均有不同程度的抑菌活性。 通過(guò)對(duì)XA-1菌株作用機(jī)理初步研究結(jié)果表明：菌株活性產(chǎn)物能強(qiáng)烈抑制病原菌菌絲的生長(zhǎng)和孢子的萌發(fā)?；煊邪l(fā)酵液培養(yǎng)基上病原菌菌絲生長(zhǎng)緩慢，菌落隆起形似傘狀，菌絲短粗，出現(xiàn)不規(guī)則膨大，孢子芽管的伸長(zhǎng)明顯受到抑制。 2.利用傳統(tǒng)分類和分子分類相結(jié)合的方法明確了菌

4、株XA-1的分類地位。通過(guò)對(duì)XA-1菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特性等方面的試驗(yàn)觀察，結(jié)合16SrRNA基因序列的測(cè)定，與Genebank序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)菌株序列進(jìn)行比較，菌株XA-1與Saccharothrixtangerinus同源性達(dá)到99.65％，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分類比較也表明其與Saccharothrixtangerinus的親緣關(guān)系最近。鑒定結(jié)果認(rèn)為，放線菌菌株XA-1的分類地位歸屬于橘色糖絲菌Saccharothrixt

5、angerinus。該菌株為稀有放線菌，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。 3.對(duì)頡頏放線菌菌株XA-1進(jìn)行了菌種繁殖培養(yǎng)基的篩選。研究表明，菌株XA-1菌種繁殖的最佳培養(yǎng)基為黃豆餅粉浸液瓊脂固體培養(yǎng)基。在此培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)密度大、產(chǎn)孢速度快、生長(zhǎng)周期短；在連續(xù)傳代培養(yǎng)5代過(guò)程中均比較穩(wěn)定，未出現(xiàn)衰退現(xiàn)象；發(fā)酵液中的抗菌物質(zhì)均有較強(qiáng)的抑菌作用。該研究結(jié)果為菌株XA-1的深入研究和開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。 4.篩選出適合菌株XA-1產(chǎn)生抗生素

6、的發(fā)酵培養(yǎng)基，并對(duì)其搖瓶發(fā)酵條件進(jìn)行了初步研究。 通過(guò)單營(yíng)養(yǎng)因子試驗(yàn)和均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)，優(yōu)化了菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的組成，同時(shí)測(cè)定了培養(yǎng)時(shí)間、菌齡、接種量、搖床溫度及轉(zhuǎn)速、初始pH、搖瓶裝液量等對(duì)菌株產(chǎn)生抗生素的影響。 研究結(jié)果表明：菌株XA-1對(duì)碳源的利用能力，依次為馬鈴薯淀粉＞葡萄糖＞乳糖＞麥芽糖＞可溶性淀粉＞蔗糖，其中馬鈴薯淀粉作為碳源時(shí)抑菌圈直徑最大，而且其在實(shí)際生產(chǎn)中容易獲得，成本低廉，因此應(yīng)用中可選用馬鈴薯淀粉作為碳源

7、；菌株對(duì)氮源的利用，以黃豆粉、黃豆餅粉和蛋白胨為最優(yōu)，其它依次為花生餅粉、(NH4)2SO4、酵母粉；對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)成分用量的單因素試驗(yàn)表明，馬鈴薯淀粉3％～5％、黃豆餅粉2％～4％、蛋白胨0.2％～0.4％、NaCl0.2％～0.4％、CaCO30.1％～0.2％，是產(chǎn)生抗生素的適宜范圍。根據(jù)均勻試驗(yàn)的結(jié)果得到了優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方組成：3.90％馬鈴薯淀粉、2.65％黃豆餅粉、0.20％蛋白胨、0.20％NaCl、0.10％CaCO3。