產(chǎn)耐高溫纖維素酶放線菌的篩選與鑒定及菌株發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、纖維素是自然界中的一種有機(jī)化合物，是最普遍的，也是最大的可再生資源的存儲容量。目前，只有少數(shù)的纖維素資源得到了有效的利用，大多數(shù)的都被浪費(fèi)掉，在環(huán)境問題上導(dǎo)致了嚴(yán)重的污染。
　　文章采用纖維素-剛果紅培養(yǎng)基的方法進(jìn)行初篩，通過觀察菌株是否產(chǎn)生透明圈來篩選降解纖維素的微生物菌株。在本試驗(yàn)中，初篩出了8株可以產(chǎn)生明顯透明菌圈的菌株。然后在高溫條件下復(fù)篩出產(chǎn)羧甲基纖維素酶活、濾紙酶活和β-葡萄糖苷酶活較高的菌株。最終篩選出一株較優(yōu)菌株，

2、為菌株B-172-A-5。該菌株在50℃條件下酶活力均最高，其羧甲基纖維素酶活為213.49 U/ml，濾紙酶活為170 U/ml，β-葡萄糖苷酶活為211 U/ml。
　　對菌株B-172-A-5進(jìn)行序列鑒定，經(jīng)過16S rDNA序列測定和生理生化特征鑒定，確定菌株B-172-A-5屬于鏈霉菌屬（Streptomyces），在NCBI上進(jìn)行比對并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，該菌株與AJ781374的16S rDNA序列的同源性最高，達(dá)99％

3、，然后建樹又與AJ781374在同一最小分枝，因此得出B-172-A-5與AJ781374為同一種，初步命名為深紅紫鏈霉菌（Streptomycesviolaceorubidus）。
　　對深紅紫鏈霉菌（Streptomyces violaceorubidus）的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。篩選適宜深紅紫鏈霉菌（Streptomyces violaceorubidus）生長的固體發(fā)酵基質(zhì)，并優(yōu)化了其發(fā)酵的基本條件，為將該菌株的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)

4、。本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)對固體發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行篩選，在篩選結(jié)果的基礎(chǔ)上，再運(yùn)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)來初步確定適宜的發(fā)酵條件，結(jié)果表明，此菌株的最佳的固態(tài)的發(fā)酵工藝（大米粉）基質(zhì)中加入小米粉與玉米秸稈，分別是30 mg/g和60 mg/g，發(fā)酵條件為接種量0.4 mL/g、初始含水量400 mg/g、培養(yǎng)時間192 h，在最佳發(fā)酵條件下其產(chǎn)孢量測定結(jié)果高達(dá)1.2×108 CFU/mL。在溫度為50℃條件下，測定其羧甲基纖維素酶活為289U/ml，濾紙酶

5、活為281U/ml，β-葡萄糖苷酶活為271 U/ml。
　　本研究通過以上研究獲得了一株高溫放線菌B-172-A-5，并對其發(fā)酵條件進(jìn)行了初步優(yōu)化。然而，我們只研究了菌株在高溫下最適產(chǎn)酶的培養(yǎng)溫度對菌株產(chǎn)酶活性的影響。菌株B-172-A-5產(chǎn)生的纖維素酶的酶學(xué)性質(zhì)還需要進(jìn)一步研究，以確定最佳酶促反應(yīng)條件。此外，對篩選出的菌株B-172-A-5，只進(jìn)行了16S rDNA序列的測定，菌株的分類地位還需要進(jìn)一步的深入鑒定，以更準(zhǔn)確的確