產堿性纖維素酶放線菌的篩選及其產酶條件與酶學性質初步研究.pdf

1、堿性纖維素酶可廣泛用于應堿性條件下纖維酶水解、洗滌、造紙、土壤改良等方面，特別是在造紙方面，其節(jié)能、節(jié)水、減小污染的優(yōu)良性能使其受到越來越多的關注。因此積極篩選產堿性纖維素酶的菌株并探索其最適發(fā)酵條件，具有重要經濟意義。 本文利用CMC透明圈分離法從造紙廠排水溝污泥中篩選分離到20株能在以纖維素(CMC-Na)為唯一碳源的篩選培養(yǎng)基上生長的菌株，采用肉眼觀察和剛果紅溶液染色的方法作進一步識別，獲得透明圈較大的菌株4株。在此基礎上

2、，進行液體培養(yǎng)，測定酶活，得到l株產酶活性較高的菌株，命名為Mys-5。對其形態(tài)學、和生理生化特征進行研究，經初步鑒定為放線菌孢囊菌屬的一個種(Intrasporangium sp)。 在對菌株Mys-5發(fā)酵條件優(yōu)化中，采用單一因子實驗法，探討不同營養(yǎng)元素對發(fā)酵的影響，從而確定液體發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基組成。培養(yǎng)基組成為：CMC-Na 20g，(NH4)2SO4 2g，CaCl2 0.3g，MgSO4-7H2O 0.3g，K2HPO4

3、 2g，F(xiàn)eSO4 0.005g，MnSO40.002g，ZnCl2 0.002g，CoCl2 0.002g，加900mL水，另配10％的Na2CO3，分開滅菌后與上述培養(yǎng)基成分按1:9的比例混合均勻，使培養(yǎng)基的初始pH值為9.5-10。分別實驗了其他培養(yǎng)條件對發(fā)酵產酶的影響，提出最佳的培養(yǎng)條件。最佳發(fā)酵條件為：溫度28℃，起始PH值 10，搖床轉速150rpm，接種量10％。Mn2+，Zn2+，Co2+能較大的激活酶的活性，Cu2+A