除草放線菌的篩選及其培養(yǎng)條件的研究.pdf

1、放線菌作為大多數(shù)抗生素和一些活性物質(zhì)的產(chǎn)生菌，也是開發(fā)天然除草活性物質(zhì)的重要來源。因此本研究的主要目的是通過除草劑生測方法篩選出具有除草活性的菌株，并對除草活性菌株的生長代謝、穩(wěn)定性、鑒定及培養(yǎng)條件4個方面進行了初步的研究。 從沈陽農(nóng)業(yè)大學標本園、植物園、試驗田及鐵嶺市農(nóng)科院試驗田等地土壤樣本中分離出114株放線菌，通過蛋白核小球藻生長抑制試驗和培養(yǎng)皿法雜草生長抑制試驗兩套篩子初篩，篩選出一株具有較強除草活性的菌株W10，該菌株

2、對稗草的萌發(fā)抑制率，芽長抑制率和根長抑制率，分別為13.37％，41.91％和97.96％。結果表明該菌株對稗草的抑制作用主要表現(xiàn)為抑制根部生長。 通過植物生長抑制試驗和溫室盆栽雜革生長抑制試驗，對初篩菌株W10的除草活性進行了進一步的驗證，首先進行對毒素敏感的植物的生長抑制試驗，W10菌株對4種生物學特性不同的單、雙子葉植物表現(xiàn)出不同的抑制效果，這說明W10菌株的生物除草活性對高等植物具有一定的生理選擇性；溫室盆栽試驗結果表明

3、發(fā)酵上清液對水1∶1稀釋時，對稗草的抑制效果較顯著，萌發(fā)抑制率和根長的抑制均達到了50％以上，但對根的抑制率比培養(yǎng)皿法有所下降；1∶30稀釋時對稗草抑制效果大幅下降，這說明除草活性物質(zhì)對土壤復雜的環(huán)境因素比較敏感，而且按目前的發(fā)酵液配方和發(fā)酵條件對W10菌株進行發(fā)酵，所得發(fā)酵液中的除草活性物質(zhì)含量很低，難以滿足防治田間稗草的要求。 對除草活性菌株W10的生長代謝研究表明，菌株活性最高時正處在菌體生長的衰亡期，這說明除草活性物質(zhì)主

4、要是菌體的次級代謝產(chǎn)物，收獲有效活性產(chǎn)物的時間應該在衰亡期即96h-108h。 對W10菌株的穩(wěn)定性研究表明：菌株具有很好的傳代穩(wěn)定性，從菌體的培養(yǎng)特征及發(fā)酵液除草活性變化來考察菌株連續(xù)培養(yǎng)10代的傳代穩(wěn)定性，各代菌株仍表現(xiàn)與出發(fā)菌株相似的特征特性；菌株發(fā)酵液的熱穩(wěn)定性較差，80℃以上處理30min活性明顯下降，110℃以上處理30min活性完全喪失；菌株發(fā)酵液的酸、堿穩(wěn)定性較好，在酸性條件pH=3及堿性條件pH=10下處理，其

5、除草活性與未經(jīng)處理的發(fā)酵液相比均沒有明顯變化。 根據(jù)W10菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征以及生理生化特性對菌株分類地位進行了初步的鑒定，鑒定結果為：W10菌株為鏈霉菌屬的灰色鏈霉菌的一個變種。 對W10菌株發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件進行正交試驗，結果表明：W10菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：丙三醇5.0％、酵母膏4.0％、(NH4)2SO41.0％、K2HPO40.06％；W10菌株的最佳培養(yǎng)條件為500mL三角瓶裝液量60mL、