高效降解石油放線菌的分離篩選及其降解特性研究.pdf

1、隨著石油開(kāi)采及石油工業(yè)的發(fā)展，石油已成為人類生存和發(fā)展的最主要能源之一。在石油開(kāi)采、貯運(yùn)及使用等過(guò)程中，由于事故、不正常操作和檢修等原因，都會(huì)發(fā)生石油烴類的溢出和排放。石油污染給人類和環(huán)境帶來(lái)巨大的危害，已威脅到人類和其他生物的生存和發(fā)展。因此，世界各地學(xué)者十分關(guān)注石油污染問(wèn)題，積極尋求安全、經(jīng)濟(jì)、可靠的治理方法。近年來(lái)，隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，微生物在環(huán)境保護(hù)方面的應(yīng)用前景也越來(lái)越廣闊。與物理、化學(xué)方法相比，石油污染微生物修復(fù)技術(shù)具有

2、巨大的優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成為人們研究的熱點(diǎn)。
　　本研究從長(zhǎng)期受石油污染的土壤中分離得到一株有效石油降解菌，命名為z1a-B，并對(duì)其進(jìn)行鑒定；然后對(duì)其進(jìn)行誘變處理以期獲得高效石油降解菌，并對(duì)高效石油降解菌進(jìn)行降解條件等方面的研究，得到了以下結(jié)果：
　　1.通過(guò)富集、馴化和分離試驗(yàn)，篩選得到一株石油降解優(yōu)勢(shì)菌株，經(jīng)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)測(cè)定其石油降解率為66.4％。
　　2.采用血平板和排油活性試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，菌株Z1a-B能夠產(chǎn)生生物表面

3、活性劑，并且具有很強(qiáng)的溶血和排油活性，說(shuō)明其具有較強(qiáng)的產(chǎn)生生物表面活性劑的能力。為進(jìn)一步了解菌株Z1a-B降解石油的能力，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GS-MS)法對(duì)降解前后原油各組分進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株Z1a-B對(duì)C12～C38中大部分長(zhǎng)鏈正構(gòu)烷烴都有很好的降解效果，說(shuō)明該菌株具有很寬的降解譜，能夠很好的降解石油污染物。
　　3.綜合利用菌落形態(tài)、個(gè)體形態(tài)及掃描電鏡孢子形態(tài)，并輔助生理生化檢測(cè)，初步鑒定菌株Z1a-B為鏈霉菌屬白

4、孢類群。
　　4.以菌株Z1a-B為出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行紫外誘變和紫外加LiCl復(fù)合誘變，對(duì)比誘變效果選擇合適的誘變方式，誘變后進(jìn)行平板預(yù)篩和搖瓶復(fù)篩，結(jié)果表明紫外加LiCl復(fù)合誘變的效果好于紫外誘變，利用紫外加IACI復(fù)合誘變對(duì)菌株z1a-B進(jìn)行誘變處理，得到一株石油降解能力顯著提高的菌株ZBⅡ-12。
　　5.對(duì)比誘變前后菌株的菌落特征和降解能力發(fā)現(xiàn)，誘變后菌落形態(tài)發(fā)生變化，菌株ZBⅡ-12產(chǎn)生物表面活性劑的能力及活性有所

5、增加，降解能力有所提高，降解譜變寬，能夠降解更多種類的石油烴，降解也更完全。
　　6.最適氮磷營(yíng)養(yǎng)源和培養(yǎng)條件優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株ZBⅡ-12的最適氮源和磷源分別為KNO3和K2HPO4；其最適生長(zhǎng)條件為初始pH值7.5，溫度30℃，接種量8％，石油濃度7 g·L-1，并且pH值6.0～9.0時(shí)和溫度20~42℃時(shí)菌株ZBⅡ-12的石油降解率都達(dá)到60％以上，說(shuō)明其能耐受較大范圍pH值、溫度的變化。
　　7.采用正交試驗(yàn)對(duì)

6、石油污染土壤的室內(nèi)生物修復(fù)研究表明，影響石油降解率各因素的主次順序依次為接種量>KNO3>K2HPO4>鋸末，土壤修復(fù)中石油降解的最優(yōu)組合為KNO33g·L-1、K2HPO40.75g·L-1、鋸末30g·L-1、接種量8％。進(jìn)行石油污染土壤修復(fù)處理時(shí)，添加適量的菌劑、氮磷源營(yíng)養(yǎng)物、膨松劑，可以有效提高微生物的降解效率。通過(guò)對(duì)植物生長(zhǎng)量的測(cè)量，與對(duì)石油污染物降解率的測(cè)定結(jié)果相符，更直觀地反映了微生物治理石油污染的效果。
　　8.固