煙草黑脛菌拮抗放線菌的篩選、鑒定及其生防效果研究.pdf

1、煙草黑脛?。≒hytophthora parasitica var.Nicotianae）是烤煙生產(chǎn)上主要的病害之一，我國(guó)平均每年的煙草黑脛病發(fā)病面積達(dá)76373hm2，產(chǎn)量損失2.86926×107kg，造成的損失達(dá)一億元以上。對(duì)于該病的防治，目前主要采用化學(xué)農(nóng)藥防治，隨著化學(xué)農(nóng)藥引起的環(huán)境污染以及人們公認(rèn)的3R（抗性、殘毒、再猖獗）問(wèn)題的出現(xiàn)，利用自然環(huán)境中的拮抗微生物防治植物病害愈來(lái)愈受到人們的重視。放線菌是拮抗微生物的重要來(lái)源，

2、在植物病害的生物防治中占有重要地位。本試驗(yàn)從采自山東幾大煙區(qū)的煙草根圍土壤中分離篩選出對(duì)煙草黑脛病菌有拮抗效果的放線菌，進(jìn)行溫室控病研究及菌株的鑒定，并進(jìn)一步對(duì)發(fā)酵條件、發(fā)酵產(chǎn)物的穩(wěn)定性及促生作用進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.采用稀釋平板法從土壤中分離到125株放線菌。采用平板對(duì)峙法和菌絲生長(zhǎng)速率法相結(jié)合對(duì)其進(jìn)行初步篩選和再次篩選，經(jīng)初步平板篩選后，獲得了對(duì)煙草黑脛病菌拮抗活性較強(qiáng)的8株放線菌菌株。經(jīng)發(fā)酵液再次篩選發(fā)現(xiàn)

3、在這8株菌株中菌株97對(duì)煙草黑脛病菌的抑菌效果最好，抑制率達(dá)58％。菌株97菌體及其產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)除對(duì)煙草黑脛病菌有較強(qiáng)的抑制作用外，還對(duì)供試的其他13種病原真菌都有一定的抑制作用，尤其對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌，菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)68％。
　　 2.對(duì)菌株97的形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察、生理生化特性分析、細(xì)胞壁組分測(cè)定及16S rRNA序列分析結(jié)果表明：該菌內(nèi)菌絲無(wú)橫隔、不斷裂，氣生菌絲多分枝。孢子絲長(zhǎng)直或彎曲，孢子短桿狀，表面光滑。細(xì)胞壁化學(xué)

4、組分I型，糖型C型，表明該菌株屬于鏈霉菌屬（Streptomyces）；同時(shí)，在以16S rRNA序列為基礎(chǔ)構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中，菌株97與淡紫灰鏈霉菌（Streptomyces lavendulae）的同源性最高，為98.48％。初步鑒定，菌株97為淡紫灰鏈霉菌（S.Lavendulae）。
　　 3.為了提高活性物質(zhì)產(chǎn)量，對(duì)菌株97的培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選并對(duì)其發(fā)酵工藝條件進(jìn)行了初探。得到培養(yǎng)基最佳配方為：小米10.0 g，葡萄糖

5、10.0 g，碳酸鈣2.0 g，氯化鈉2.5 g,蛋白胨3.0 g。最佳發(fā)酵工藝條件為：種子液菌齡36h，接種量6％，發(fā)酵時(shí)間120h，培養(yǎng)基初始pH7.0，裝液量為50mL/250mL三角瓶，發(fā)酵溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速180r/min。
　　 4.對(duì)菌株97發(fā)酵液的穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果表明：發(fā)酵液在4℃條件下儲(chǔ)藏穩(wěn)定性更好，在偏酸性或中性條件下穩(wěn)定，有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和抗紫外線照射能力，對(duì)蛋白酶K穩(wěn)定性較好。
　　 5.通過(guò)