拮抗放線菌對(duì)煙草黑脛病的控病研究.pdf

1、煙草是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。近幾年來(lái)，重慶煙區(qū)煙草黑脛病發(fā)病甚為嚴(yán)重，造成大量經(jīng)濟(jì)損失。在煙草病害的多種防治方法中，生物防治對(duì)煙葉生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展具有較好的應(yīng)用前景。放線菌是生防微生物的重要來(lái)源，在植物病害的生物防治中占有重要地位。本試驗(yàn)針對(duì)煙草黑脛病菌，主要進(jìn)行了拮抗放線菌的篩選、發(fā)酵液抑菌活性研究、發(fā)酵液的穩(wěn)定性及發(fā)酵條件的優(yōu)化，并進(jìn)一步探討其生防控病機(jī)理及其防效。具體結(jié)果如下：
　　 1、采用對(duì)峙法將實(shí)驗(yàn)室已分離的30株

2、放線菌進(jìn)行初篩和復(fù)篩。初篩結(jié)果表明：21株放線菌對(duì)煙草黑脛病菌有拮抗活性，其中菌株YSL5-2拮抗效果最好，達(dá)到了36mm。抑菌帶寬在10mm以上的菌株有7株。復(fù)篩平板拮抗試驗(yàn)中，初篩時(shí)拮抗效果最好的7株放線菌均保持較好的拮抗作用，抑菌圈帶寬達(dá)到了12～30mm。采用抑制孢子萌發(fā)法和抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定平板復(fù)篩拮抗效果較好的11株放線菌發(fā)酵液對(duì)煙草黑脛病菌的抑制作用。測(cè)定表明：7株放線菌發(fā)酵液對(duì)煙草黑脛病菌孢子萌發(fā)有較好的抑制作用，抑

3、制率均在50％以上，其中菌株CWA-4、LZ2-7、SYZ2-6對(duì)煙草黑脛病菌孢子萌發(fā)抑制率均達(dá)到100％。對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)到80％以上有8株，抑制率在90％以上的有5株，其中菌株CWA-4對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)96.97％。
　　 2、對(duì)4株拮抗效果較好的放線菌進(jìn)行抑菌譜測(cè)定。結(jié)果表明：4株放線菌對(duì)23株供試病原菌有較好的抑制作用。菌株LZ2-7、CWA-4、YYZ-8分別對(duì)5株供試病原菌抑菌帶寬達(dá)15m

4、m以上，對(duì)12株供試病原菌抑菌帶寬達(dá)10mm以上。菌株YSL5-2的抑制效果最好，抑菌帶寬達(dá)15mm以上的供試病原菌有22株，其中11株抑菌帶寬達(dá)20mm以上。
　　 3、為了篩選一種拮抗放線菌較好的保存方法，選用斜面保存法、蒸餾水保存法、甘油保存法、液體石蠟覆蓋保存法和砂土管保存法5種方法保存7株拮抗放線菌。試驗(yàn)結(jié)果顯示：除保存6個(gè)月時(shí)蒸餾水保存法和液體石蠟保存法各有6株菌株對(duì)煙草黑脛病菌的拮抗活性較高，在3個(gè)月時(shí)甘油保存法有

5、6株菌株拮抗活性較高，保存9和12個(gè)月時(shí)，采用甘油保存法保存7株菌株拮抗活性均為較高。由此可看出，甘油保存法較其他保存方法較好。但是，5種方法保存的菌株對(duì)煙草黑脛病菌拮抗活性在保存6個(gè)月比保存3個(gè)月時(shí)明顯下降，說(shuō)明5種保存方法對(duì)保持拮抗放線菌拮抗活性穩(wěn)定性還不理想。
　　 4、初步研究了菌株LZ2-7的發(fā)酵條件，確定了最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件。單因素發(fā)酵試驗(yàn)表明：最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：玉米粉10g、蔗糖10g、氯化鈉2g、硫

6、酸銨3g、碳酸鈣2g、pH值7.2～7.4、蒸餾水1000mL。最佳發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基初始pH為7.0，28℃培養(yǎng)，裝瓶量為250 mL，搖床轉(zhuǎn)速為140 r/min，培養(yǎng)5d左右抑菌物質(zhì)活性達(dá)最高峰。以煙草黑脛病菌為指示菌，測(cè)定了菌株LZ2-7、CWA-4發(fā)酵液的穩(wěn)定性。結(jié)果表明：兩個(gè)菌株隨時(shí)間增長(zhǎng)，抑制率不斷下降，但在貯藏前30d兩株放線菌抑制率均保持在80％以上，均有較好的抑菌活性，貯藏90d時(shí)，抑制率幾乎下降三分之一，而且兩株菌

7、同一時(shí)間在4℃條件下貯藏抑菌活性較高。兩個(gè)菌株都在弱酸性和中性條件時(shí)抑菌活性較高。溫度在80℃以下抑菌活性都比較穩(wěn)定，80℃以上隨加熱時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率下降速率較快，尤其是發(fā)酵液CWA-4121℃處理30min抑制率下降至2.66％。在日光照射下兩個(gè)菌株抑菌活性較穩(wěn)定，但紫外光照射下，抑菌活性不斷下降，尤其是菌株CWA-4經(jīng)過(guò)4h紫外光的連續(xù)照射抑制率下降了27.84％。
　　 5、初步研究了菌株L Z2.7、CWA-4對(duì)煙草黑

8、脛病菌的抑制機(jī)理。試驗(yàn)表明：放線菌對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)、游動(dòng)孢子囊的產(chǎn)生、釋放、游動(dòng)孢子游動(dòng)、萌發(fā)、病原菌的侵入及致病性都有明顯的抑制作用。經(jīng)放線菌發(fā)酵液處理的煙草黑脛病菌菌絲表現(xiàn)為菌絲凹陷、干癟、皺縮、變形、菌絲溶解等現(xiàn)象。
　　 6、選用4株放線菌采用五種不同處理方法對(duì)煙草黑脛病進(jìn)行溫室控病試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明：只接入病原菌的發(fā)病對(duì)照CK2的發(fā)病率高達(dá)70％，而接入拮抗放線菌的煙苗發(fā)病率相對(duì)較輕，其中采用處理二接入菌株CWA

9、-4的煙苗僅有一株發(fā)病，其相對(duì)防效達(dá)到了95.55％。4株菌株各處理的相對(duì)防效均超過(guò)50％，其中菌株CWA-4各處理的相對(duì)防效均在70％以上，菌株LZ2-7各處理的相對(duì)防效均在69％以上。五種處理方法比較，菌株LZ2-7、CWA-4和YYZ-8采用處理方法五的相對(duì)防效較高，分別為93.64％、96.18％、73.24％；菌株YSL5-2采用處理方法二相對(duì)防效較好，為82.17％。不同菌株相對(duì)防效最好的處理方法不同，具體生產(chǎn)應(yīng)用中可根據(jù)不

10、同菌株選用適宜的處理方法。在接入病原菌7d、14d后，調(diào)查煙苗發(fā)病情況，計(jì)算拮抗菌相對(duì)防效的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，施加拮抗放線菌對(duì)煙草黑脛病都有很明顯的防控作用，總體來(lái)說(shuō)，接病原菌后7d的防效均較高，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，防效有下降趨勢(shì)。個(gè)別菌株也有例外，如菌株CWA-4處理五及YSL5-2處理一的相對(duì)防效較穩(wěn)定。從選擇對(duì)煙草黑脛病有長(zhǎng)期、較好的防治效果的優(yōu)良菌株來(lái)看，菌株CWA-4采用處理方法五防效最好，而且相對(duì)穩(wěn)定。
　　 選用溫室控病試

11、驗(yàn)防效較好的菌株LZ2-7和CWA-4進(jìn)行小區(qū)防治試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：放線菌發(fā)酵液對(duì)煙草黑脛病有較好的防治作用，處理后的煙草發(fā)病率和病情指數(shù)均明顯低于對(duì)照。只接入病原菌的發(fā)病對(duì)照CK2的發(fā)病率高達(dá)46.67％，而接入拮抗放線菌的煙苗發(fā)病率相對(duì)較輕，其中采用處理方法五接入菌株LZ2-7的煙苗僅有3株發(fā)病，發(fā)病率為10％。菌株LZ2-7五種施用方法中，處理五的防治效果最好，相對(duì)防效達(dá)74.32％。其次是處理三和處理一。菌株LZ2-7與CWA