海洋放線菌活性菌株的篩選及1023菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、海洋放線菌分布廣，種類(lèi)多，可產(chǎn)生許多結(jié)構(gòu)新穎、功能獨(dú)特及毒副作用較低的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是尋找新藥或先導(dǎo)化合物的重要資源。本論文對(duì)13株分離自深海底泥和海洋動(dòng)植物體的海洋放線菌的抗菌、抗乙酰膽堿酯酶和抗腫瘤等活性進(jìn)行了分析，并對(duì)其中一株具有較強(qiáng)體外抗腫瘤活性菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，旨在發(fā)掘具有潛在應(yīng)用前景的活性化合物，為開(kāi)發(fā)新的微生物藥物奠定基礎(chǔ)。 采用改進(jìn)的Ellman法，微量液體稀釋法和MTT法，分別對(duì)13株海洋放

2、線菌的3種培養(yǎng)基發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的抗乙酰膽堿酯酶活性、抗菌活性和體外抗腫瘤活性進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：有92.3％的提取物(濃度為100μg/mL)對(duì)AChE的抑制率大于50％，其中01菌株的海水改良YSP培養(yǎng)基提取物和18菌株的海水YMG培養(yǎng)基提取物具有較強(qiáng)的活性，當(dāng)提取物濃度降到20μg/mL時(shí)，對(duì)AChE的抑制仍分別可達(dá)51.2％和53.1％；有9個(gè)提取物對(duì)大腸桿菌或枯草芽孢桿菌有抑制作用，占總供測(cè)樣品的23.1％，其中對(duì)大腸桿菌

3、和枯草芽孢桿菌有抑制作用的分別為5.1％和20.5％；有14個(gè)提取物(濃度為100μg/mL)具有體外抗腫瘤活性(對(duì)KB或HepG2的抑制率=50％)，占總供測(cè)樣品的35.9％，其中菌株1023具有很強(qiáng)的活性，它的3個(gè)培養(yǎng)基提取物在20μg/mL時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞KB的抑制率都在60％以上。 采用形態(tài)學(xué)鑒定方法及16SrDNA序列分析技術(shù)對(duì)1023菌株進(jìn)行鑒定，將其歸類(lèi)為鏈霉菌屬(Streptomyces sp.)。 以半海水

4、高氏一號(hào)為培養(yǎng)基，200L發(fā)酵罐發(fā)酵制備1023菌株發(fā)酵液120L。采用硅膠柱層析、中壓反相柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析和重結(jié)晶等方法從發(fā)酵液的乙酸乙酯萃取物中分離到8個(gè)化合物(mPm7，HWX13。HWX23，HWX27，HWX29，HWX33，HWX35，HWX39)。利用MS，NMR和紅外等波譜技術(shù)，鑒定它們的結(jié)構(gòu)?；衔飉Pm7為valinomycin，其余7個(gè)為含有nonactic acid及其衍生物：HWX

5、13，HWX27，HWX29，HWX33，HWX35，HWX39分別是homononactic acid，F(xiàn)eigrisolide C，nonactic acid acetate，homononactic methylester，nonactic methylester，和nonactic acid，HWX23的結(jié)構(gòu)鑒定為methyl 2-(5-(3-hydroxybutyl)-tetrahydrofuran-2-yl)propanoa

6、te，是新化合物。 對(duì)這8個(gè)化合物進(jìn)行了生物活性的測(cè)試。mPm7對(duì)Hela細(xì)胞的IC50為3.04ng/mL，對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和結(jié)核分枝桿菌的MIC均為50μg/mL，對(duì)白色假絲酵母的MIC為1.56μg/mL，對(duì)啤酒酵母的的MIC為6.25μg/mL。其余7個(gè)化合物沒(méi)檢測(cè)到明顯的生物活性，新化合物HWX23的其它活性有待進(jìn)一步的研究。 本文的研究結(jié)果表明，海洋放線茵中蘊(yùn)藏著較豐富的抗菌和抗腫瘤活性物質(zhì)產(chǎn)生菌，具