細(xì)胞毒活性海洋放線菌的篩選及兩株目標(biāo)菌株次級代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、海洋放線菌生存環(huán)境特殊復(fù)雜，其次級代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎、種類繁多，是新結(jié)構(gòu)活性化合物的重要來源。為了尋早結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物，本論文采用活性追蹤的方法開展了海洋放線菌的抗腫瘤活性篩選及2株海洋放線菌次級代謝產(chǎn)物的研究工作。內(nèi)容包括：海洋放線菌的分離與抗腫瘤活性篩選；活性菌株的初步評價及抗腫瘤活性成分的追蹤分離；單體化合物的結(jié)構(gòu)解析；單體化合物抗腫瘤活性的初步評價。 從威海、福建沿海海泥樣品及廣東紅樹林根部泥樣共10個樣品中，分離得到

2、放線菌262株。采用海蝦生物致死法和抑菌試驗(yàn)相結(jié)合的一級篩選、K562細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)的二級篩選模型，以細(xì)胞周期抑制和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)以及壞死性細(xì)胞毒為活性指標(biāo)，對這262株放線菌進(jìn)行活性篩選，獲得活性菌株17株。對17株活性菌株和另外一株實(shí)驗(yàn)室保藏的活性菌株共18株放線菌進(jìn)行了穩(wěn)定性試驗(yàn)和化學(xué)篩選的初步評價，獲得了12株具有良好穩(wěn)定性的放線菌。其中WHl-2216-6和THW-7用TLC和IItPLC進(jìn)行的化學(xué)評價表明存在系列結(jié)構(gòu)類似物。

3、選定這兩株菌作為本論文的研究對象。 在考察了目標(biāo)菌株的培養(yǎng)條件后，對2株目標(biāo)活性菌進(jìn)行了大量發(fā)酵。對發(fā)酵產(chǎn)物運(yùn)用萃取，薄層層析，正相、反相硅膠柱層析，LH-20凝膠柱層析，反相高壓液相等化學(xué)的分離純化手段，采用人慢性髓性白血病細(xì)胞K562的鏡檢結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)的篩選模型，進(jìn)行活性追蹤分離。從WH1-2216-6的次級代謝產(chǎn)物中分離得到20個單體化合物(1-17、19、21、22)：從THW-7的次級代謝產(chǎn)物中分離得到6個單體化合物

4、(14-15、18、20、23-24)共24個化合物。 繼而，利用理化性質(zhì)和波譜學(xué)方法(IR，UV，MS，NMR，X-ray)結(jié)合化學(xué)反應(yīng)的方法(酯化反應(yīng)等)闡述了其中20個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)(化合物結(jié)構(gòu)及名稱參見Table 1)，其中新化合物3個(1-3)。所得的化合物主要是含氮類化合物及苯的衍生物，結(jié)構(gòu)類型包括：吡啶類生物堿8個(1-8)，環(huán)二肽5個(14-17)，核苷及堿基2個(18、22)，苯的衍生物5個(9-13)。利用

5、MTT法、SRB法，對分離獲得的單體化合物的抗腫瘤活性進(jìn)行了初步評價。從中篩選出了5個活性化合物(1，2，4，5，8)?；衔?對P388細(xì)胞具有中等抑制作用，IC<,50>為24μM。化合物2對P388具有強(qiáng)烈的抑制作用，IC<,50>為0.35 μM，對K562具有中等抑制作用，IC<,50>為32gM。化合物4對A549、P388、HL60、BEL-7402細(xì)胞的IC<,50>分別為0.32、4.23、3.75、5.15μM?；?/p>

6、物5對A549、P388、HL60、BEL-7402細(xì)胞的IC<,50>分別為0.26、0.64、0.71、0.89μM?；衔?對P388具有中等抑制作用，IC<,50>為38μM。同時這也是首次對此類吡啶類生物堿抗腫瘤活性的報(bào)道。 本文對兩株海洋放線菌的次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行了系統(tǒng)研究，共分離鑒定了20個化合物，包括新化合物3個，分別是caerulomycine H、 caerulomycine F、caerulomvcine