水稻品種抗瘟遺傳多樣性及抗瘟基因分子標記研究.pdf

1、用抗病基因保守區(qū)域合成的38個引物組合成28個引物對,對中國水稻麗江新團黑谷(LTH)近等基因系品種進行擴增.結果表明,不同引物對對同一近等基因系的擴增圖譜有很大差異.引物對LM637/LM638擴增譜帶最多,共40條;Ptokin1N/Ptokin2N僅擴增1~2條模糊的條帶;而Ptokin2-inv1/Ptokin2-inv2擴增后無條帶出現(xiàn).此外,同一引物對(S2/AS1)對不同近等基因系(LTH與Co39)擴增的圖譜亦有較大差異

2、.選擇擴增譜帶豐富且據(jù)不同類型保守區(qū)域設計的3對引物XLRRfor/XLRRrev、S1/AS3和Ptokin1/Ptokin2,對江蘇27個品種進行擴增.結果指出,3對引物共擴增出清晰可辨的譜帶127條,其中多態(tài)性帶101條,占總數(shù)的79.52％.3對引物中擴增譜帶和多態(tài)性帶頻率最高的是XLRRfor/XLRRrev,共擴增譜帶47條,其中多態(tài)性帶40條,占85.11％.此外,3對引物擴增的多態(tài)性譜帶的分子量大小基本無差異.根據(jù)聚類分

3、析,3對引物對或引物組合擴增的RGA圖譜可將品種分為多種類型,這些RGA圖譜類型與病菌7個小種接種鑒定的抗病表型沒有完全的對應關系.其中XLRRfor/XLRRrev引物對其組合的RGA圖譜類型似乎與抗病表型有較好的吻合程度,這可能是由于該引物對來自水稻之緣故.以28對引物對LTH近等基因系品種進行擴增,有11對引物能擴增出特異性條帶,共回收特異性片段33個.將回收的片段重新擴增,有11個片段獲單一條帶.選擇其中兩個480~490bp片

4、段(HS-1和HS-19)進行探針標記.點雜交試驗表明,所有供試品種都有雜交信號,這說明這些片段在各品種中都有相似的序列或部分同源序列.PCR擴增產(chǎn)物電泳后經(jīng)Southern雜交發(fā)現(xiàn),片段HS-1在含有Pi-ta<'2>抗性基因的品種F-128-1、N04中有特異的雜交帶出現(xiàn),這表明此序列可能與抗性基因Pi-ta<'2>連鎖或是抗性基因的一部分.用引物對XLRRfor/XLRRrev對202個品種進行擴增,在480bp處出現(xiàn)特異帶的品種