綿、山羊胚胎移植技術(shù)產(chǎn)業(yè)化及相關(guān)生物技術(shù)的研究.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文綿、山羊胚胎移植技術(shù)產(chǎn)業(yè)化及相關(guān)生物技術(shù)的研究姓名：余文莉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：張忠誠曾申明2002.6.1摘要本研究通過對綿、山羊胚胎移植主要環(huán)節(jié)的適宜技術(shù)方案及影響綿、山羊胚胎移植成功率的因素進行研究。為綿、山羊胚胎移植技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化提供高效、穩(wěn)定的技術(shù)體系。同時，通過對相關(guān)生物技術(shù)領(lǐng)域，如IVP胚胎生產(chǎn)技術(shù)、ICSI胚胎生產(chǎn)技術(shù)及ICSI轉(zhuǎn)基因等技術(shù)的研究，進一步拓展胚胎移植技術(shù)

2、的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展空間。本研究的內(nèi)容包括：1綿、山羊同期發(fā)情技術(shù)的研究：2綿、山羊超數(shù)排卵技術(shù)的研究；3綿、山羊胚胎采集和移植技術(shù)的研究；4綿羊體內(nèi)和體外生產(chǎn)胚胎冷凍保存技術(shù)的研究：5豬ICSI轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究。!用孕酮類海綿栓和PMsG對綿羊及山羊進行同期發(fā)情處理，比較不同的PMSG制劑和劑量對同期發(fā)情程度、黃體數(shù)、移植妊娠率的影響。結(jié)果表明，綿羊在去栓后同期發(fā)情率為8917％(2965／3325)，發(fā)情羊在去栓后20～84h之內(nèi)呈正態(tài)分布

3、，在24～72h發(fā)情的羊占總發(fā)情羊的9157％。通過對黃體數(shù)、卵泡數(shù)、受體合格率、移植妊娠率的比較表明國產(chǎn)PMSG最適劑量為280Iu：Folligon在260IU和280IU趨向于有較高的產(chǎn)羔率。山羊去栓后同期發(fā)情率為9417％，分布在2072h之間，其中8763％的發(fā)情羊集中在20～36h，F(xiàn)olligon在1601U1801U之間是山羊同期發(fā)情處理的適宜劑量。以東弗利生、德克賽爾、多賽特、白薩?？巳庥镁d羊及波爾山羊、阿爾巴斯絨山羊

4、為對象對綿、山羊品種、年齡、季節(jié)、FSH制劑、超排方案、重復(fù)超排、輸精系統(tǒng)、沖胚方法等因素對超數(shù)排卵的影響進行了研究。結(jié)果表明東弗利生羊的胚胎生產(chǎn)能力最強。其次是白薩?？恕⒍噘愄睾偷驴速悹?。在綿羊繁殖季節(jié)和非繁殖季節(jié)，用孕酮類陰道海綿栓對超排羊進行同期發(fā)情處理分別用oFSHOvagen和Embryos進行3天6次注射，在母羊去栓后的40~44小時不觀察發(fā)情，進行腹腔內(nèi)窺鏡法子宮深部輸精，用羊?qū)Ｓ玫臎_卵管進行子宮手術(shù)沖胚。間隔152個月進

5、行3次以上重復(fù)超排處理在商業(yè)化胚胎移植計劃中是可行的。在山羊中，外源孕酮能有效克服由于黃體退化引起的采胚效率降低的現(xiàn)象。在超排反應(yīng)方面，成年羊與育成羊差異不顯著。第1次超排與第2次超排之間在可用胚獲得率、受精率及胚胎退化率方面均無顯著差異(P005)。在山羊超數(shù)排卵中，常規(guī)人工輸精和腹腔內(nèi)窺鏡法輸精是適宜的輸精方式，但用腹腔內(nèi)窺鏡輸精時應(yīng)適量注射PMSG。綿羊胚胎冷凍技術(shù)的研究表明，采用15M7醇做冷凍保護劑對胚胎進行常規(guī)冷凍，A級胚胎