布魯氏菌Omp19抗原性研究及內(nèi)蒙古人間布魯氏菌病橫斷面調(diào)查.pdf

1、布魯氏菌病（Brucellosis，簡稱布病）是一種由布魯氏菌（Brucella.spp，簡稱布氏菌）引起的人畜共患傳染病，主要傳染源是牛、羊、豬等家畜，其中羊種菌最易感染人。診斷和預(yù)防是目前控制該病的有效手段，但可以獨(dú)立用于布病的診斷方法不足以完善，間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(iELISA)操作簡單、實(shí)驗(yàn)條件要求低、適合廣泛推廣。隨著布病的廣泛流行，全國絕大部分省市地區(qū)均相繼分離到了布氏菌，而按照布病手冊(cè)進(jìn)行鑒定時(shí)需要有標(biāo)準(zhǔn)菌株做對(duì)照，但又

2、存在致病性高、購買和運(yùn)輸難度大等問題，這對(duì)工作人員存在很大的風(fēng)險(xiǎn)。布病主要集中爆發(fā)在農(nóng)區(qū)和牧區(qū)這些地區(qū)，對(duì)其進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查將會(huì)對(duì)布病的流行及發(fā)展趨勢有進(jìn)一步的了解。為此本研究從診斷方法、生物安全和現(xiàn)場調(diào)查三個(gè)方面對(duì)布病展開了系統(tǒng)的研究。
　　研究一為了完善布病診斷方法，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-30a-omp19，原核表達(dá)并純化了布氏菌Omp19，通過Western-blot驗(yàn)證其抗原性，以該蛋白作為包被抗原，建立檢測羊種布氏菌的iEL

3、ISA，對(duì)其重復(fù)性和敏感性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，通過對(duì)180份臨床羊血清樣本進(jìn)行了檢測，并與我國布病診斷標(biāo)準(zhǔn)試管凝集試驗(yàn)(SAT)進(jìn)行了比較，利用SPSS軟件對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，iELISA與SAT相比，陽性符合率為96.81％，陰性符合率為77.91％，Kappa值為0.7531，兩種方法中高度一致，診斷總符合率達(dá)到87.78％，可以作為一種有效的羊種布氏菌血清學(xué)診斷的備用方法。
　　研究二為尋找牛羊豬種布氏菌生物Ⅰ型標(biāo)準(zhǔn)參考菌株

4、544A、16M、1330S和相應(yīng)疫苗菌株S19、M5、S2的相同與差異點(diǎn)，探索將3株疫苗菌株用于鑒定時(shí)作為對(duì)照菌株的可能性。采用生化分型鑒定、16SrDNA序列分析、BCSP31-PCR、AMOS-PCR、多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列(MLVA)、多位點(diǎn)序列分型(MLST)及脈沖場凝膠電泳(PFGE)等多種方法對(duì)3對(duì)標(biāo)準(zhǔn)參考菌株和疫苗菌株進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)544A與S19、1330S與S2相似性很高，16M與M5存在

5、差異。各種生化鑒定方法、16SrDNA序列分析、BCSP31-PCR、AMOS-PCR試驗(yàn)中，可用牛羊豬種布氏菌生物Ⅰ型疫苗菌株替代標(biāo)準(zhǔn)參考菌株;多重PCR和PFGE中試驗(yàn)中可用S2和S19替代1330S和544A; MLST中，可用S2替代1330S。MLVA可區(qū)分三對(duì)疫苗菌株和標(biāo)準(zhǔn)參考菌株?？烧f明S19和S2可作為參考菌株代替544A和1330S，M5與16M在部分實(shí)驗(yàn)中可以替代。但在毒力實(shí)驗(yàn)中不能替代。
　　研究三為了解內(nèi)蒙

6、古自治區(qū)的布病疫情，選擇四子王旗開展了人間布病疫情的橫斷面調(diào)查，主要針對(duì)當(dāng)?shù)氐牟疾』疾÷?，家庭布病相關(guān)知識(shí)、態(tài)度和行為及對(duì)布病的認(rèn)知等情況，以四子王旗的農(nóng)區(qū)和牧區(qū)兩個(gè)區(qū)域?yàn)檠芯繉?duì)象，各區(qū)隨機(jī)抽取5個(gè)村，每村抽取30戶，進(jìn)行家庭問卷調(diào)查并進(jìn)行單因素x2檢驗(yàn)，采集血清樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。結(jié)果在300戶家庭的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)陽性患病率為16.67％，牧區(qū)發(fā)病率為11.70％，農(nóng)區(qū)為7.90％，當(dāng)?shù)卮迕駥?duì)布病相關(guān)知識(shí)認(rèn)知率較低，感染布病危險(xiǎn)因素增加。