高粱葉枯病的室內(nèi)毒力測(cè)定畢業(yè)論文

1、<p>　　本 科 畢 業(yè) 論 文</p><p>　　題 目：高粱葉枯病的室內(nèi)毒力測(cè)定 </p><p>　　學(xué) 院： 農(nóng)學(xué)院 </p><p>　　專 業(yè)： 植物保護(hù) </p><p><b>　　目 錄</b><

2、;/p><p><b>　　摘要1</b></p><p>　　Abstract2</p><p><b>　　引言3</b></p><p>　　1 材料和方法3</p><p>　　1.1 供試材料3</p><p>　　1.2 室內(nèi)藥

3、劑篩選及配制4</p><p>　　1.3 試驗(yàn)方法5</p><p>　　2 結(jié)果與分析6</p><p>　　2.1 單劑抑制率的測(cè)定6</p><p>　　2.2 孢子抑制率及其顯著性分析8</p><p>　　2.3 毒力回歸方程的計(jì)算11</p><p>　　3

4、 結(jié)論與討論12</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)13</b></p><p><b>　　致謝14</b></p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　高粱葉枯病是高粱上一種真菌病害，本文主要是以高粱葉枯病為材料，采用生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)抑制法

5、對(duì)常用的五種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，結(jié)果表明：對(duì)于高粱葉枯2號(hào)菌株，50%異菌脲500倍液0.01和0.05顯著水平下，該病菌的生長(zhǎng)速率均為最低，孢子抑制率最高，菌落生長(zhǎng)抑制率最高，是該病菌的有效防治藥劑，而在50%嘧菌酯400倍液和3%中生菌素在0.01顯著水平下下生長(zhǎng)速率最高，菌落生長(zhǎng)抑制率最低，孢子抑制率最低，對(duì)于防治該病并無(wú)明顯效果；對(duì)于高粱葉枯4號(hào)菌株，50%異菌脲500倍液0.01和0.05顯著水平下該病菌的生長(zhǎng)速率最低，孢

6、子抑制率最高，菌落生長(zhǎng)抑制率最高，是防治該病菌的有效藥劑，而在50%嘧菌酯400倍液和800倍液下該菌株表現(xiàn)出生長(zhǎng)促進(jìn)作用。</p><p>　　關(guān)鍵詞：高粱葉枯??；殺菌劑；毒力測(cè)定；萌發(fā)抑制率</p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　Sorghum leaf blight is a new kind of f

7、ungi diseases on sorghum。This paper is based on sorghum leaf blight materials using the growth rate and spore germination inhibition method to measurement the five common fungicides indoor toxicity。The results show that：

8、For the sorghum leaf blight No.2 strain，the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid under the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control o

9、f the germs。But under </p><p>　　Key Words:sorghum leaf blight；fungicide；toxicity measurement；germination inhibition rate</p><p><b>　　引 言</b></p><p>　　高粱屬禾本科一年生草本植物，又名蜀黍

10、、秫秫、蘆粟、茭子、木稷等，高粱是釀酒的重要原料，瀘州特曲、茅臺(tái)、竹葉青等名酒都是以高粱為主要原料釀造的【1】。高粱在中國(guó)的栽培面積很廣，其中山西地區(qū)是高粱的主產(chǎn)量區(qū)，在內(nèi)蒙地區(qū)，高粱的的產(chǎn)量也占有很大的比重。</p><p>　　隨著高粱大面積的種植，一方面，高粱病害的蔓延也逐漸增長(zhǎng)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前高粱病害種類高達(dá)30多種，其主要為害以黑穗病，葉斑病，炭疽病和大斑病為主【2】，高粱散黑穗病在我國(guó)各高粱產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)病

11、，在華北、東北發(fā)病較重，近幾年來(lái)嚴(yán)重影響高粱產(chǎn)量【3】。另一方面，高粱上的新病害也逐步增多，高粱葉枯病在一些地區(qū)也被發(fā)現(xiàn)。高粱葉枯病是由細(xì)極鏈格孢（Alternaria tenuissima）引起的真菌性病害，屬于半知菌亞門(mén)半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬，鏈格孢屬是全球分布最廣，經(jīng)濟(jì)上重要的半知菌類真菌之一，其有性態(tài)在自然條件下難以見(jiàn)到，僅有十余種鏈格孢的有性態(tài)在實(shí)驗(yàn)室條件下被發(fā)現(xiàn)；其菌絲黑色，大量存在于土壤、空氣和作為培養(yǎng)料的各種有機(jī)

12、質(zhì)上，其孢子通過(guò)空氣傳播【4】。由鏈格孢引起的病害一般都屬于流行性較強(qiáng)的病害。高粱葉枯病主要危害的是高粱的葉片，影響其光合作用，從而使高粱產(chǎn)量降低。在發(fā)病初期，高粱葉片上形成梭形斑，上面長(zhǎng)有白色柱狀霉層，由于濕度的增大，在后發(fā)病期病斑的邊緣出現(xiàn)黃褐色輪紋。高粱葉枯病是高粱上一種新的病害，目前還沒(méi)有特效的防治藥劑，對(duì)此，本文采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子抑制率法對(duì)五種殺菌劑對(duì)于高粱</p><p><b>　　

13、1 材料和方法 </b></p><p><b>　　1.1 供試材料</b></p><p>　　1.1.1 供試菌種</p><p>　　采集于內(nèi)蒙古通遼市內(nèi)蒙古民族大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗(yàn)田，進(jìn)行分離純化【5】獲得兩個(gè)菌種：高粱葉枯2號(hào)菌種和高粱葉枯4號(hào)菌種，并保存于冷藏箱備用。</p><p>　　1.1

14、.2 供試藥劑及有效成分</p><p>　　1.1.3 培養(yǎng)基制備原料</p><p>　　本試驗(yàn)均采用PDA培養(yǎng)基進(jìn)行接種培養(yǎng)，培養(yǎng)基配制原料包括馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g和蒸餾水1000ml。</p><p>　　1.1.4 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備</p><p>　　超凈工作臺(tái)，LRHS-250B恒溫恒濕培養(yǎng)箱（上海賀德

15、實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），立鶴牌電熱恒溫培養(yǎng)箱（山東濰坊醫(yī)療器械廠），101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（江蘇省通州市通用科技儀器廠），萬(wàn)分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器公司)，電子顯微鏡( 日本尼康公司)，高壓滅菌鍋（上海三申），酒精燈，培養(yǎng)皿，移液管，接種環(huán)，打孔器，直尺，錐形瓶，燒杯，攪拌棒，電磁爐，鑷子等。</p><p>　　1.2 試驗(yàn)室內(nèi)藥劑梯度調(diào)節(jié)及培養(yǎng)基的配制</p><p>　　1.2

16、.1 PDA培養(yǎng)基的制備</p><p>　　按照PDA培養(yǎng)基的制備配方，配制1000ml培養(yǎng)基五組，每組分裝至3個(gè)三角瓶中，封裝完畢后，用高壓滅菌鍋121℃滅菌30min后取出冷卻備用。</p><p>　　1.2.2 藥劑梯度調(diào)節(jié)及配制方案</p><p>　　本試驗(yàn)的每個(gè)藥劑均設(shè)定五個(gè)梯度，一個(gè)對(duì)照，每個(gè)梯度三次重復(fù)。具體配制為：50%異菌脲可濕性粉劑配制

17、500倍母液，配制成500、1000、1500、2000、2500倍液；50%多菌靈可濕性粉劑配制400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；55%烯酰·福美雙水分散粒劑配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液；3%中生菌素可濕性粉劑配制成400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；50%嘧菌酯可濕性粉劑配制400倍母液，配成400、800、1000

18、、1200、1600倍液。</p><p><b>　　1.3 試驗(yàn)方法</b></p><p>　　1.3.1 生長(zhǎng)速率法</p><p>　　本試驗(yàn)需在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，因此在實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)無(wú)菌工作室和超凈工作臺(tái)進(jìn)行30min左右的紫光燈滅菌，確保將空氣中的雜菌降到最低。并且試驗(yàn)所用的培養(yǎng)皿和其他儀器都要放進(jìn)干熱滅菌箱165℃滅菌1h，冷

19、卻后取出備用。</p><p>　　首先將之前配制的培養(yǎng)基水浴加熱溶解，加入少許的抗生素后冷卻備用。在無(wú)菌條件下，將上述配置好的藥劑取1ml放入9ml冷卻至約50℃的PDA培養(yǎng)基中混合均勻，倒入消毒滅菌的培養(yǎng)皿中制成帶藥的培養(yǎng)基平板，每個(gè)藥劑濃度重復(fù)3次。然后用直徑為5mm的打孔器，在試驗(yàn)前將已經(jīng)培養(yǎng)好的高粱葉枯病2號(hào)菌種的菌落中打取直徑為5mm的菌餅（打取菌落邊緣生長(zhǎng)旺盛的菌絲），將菌餅分別接種在含不同濃度藥劑

20、的PDA平板的中心（使帶菌絲的一面接觸培養(yǎng)基），加蓋，翻轉(zhuǎn),25℃下放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。另外，每個(gè)藥劑做一個(gè)對(duì)照處理，對(duì)照組取1ml無(wú)菌水放入9ml PDA培養(yǎng)基中混合，再倒入平板中，同樣用消毒后的打孔器打取菌餅接到培養(yǎng)基上，重復(fù)三次。（高粱葉枯病4號(hào)菌種采取同樣的方法）最后在培養(yǎng)的第2、4、6天分別調(diào)查病原菌菌絲生長(zhǎng)情況，并用十字交叉法測(cè)量其菌落直徑，記錄數(shù)據(jù)。</p><p>　　1.3.2 孢子數(shù)目法&

21、lt;/p><p>　　將培養(yǎng)5至6天的病原菌取出，在培養(yǎng)皿中滴加50ul的土溫試劑和500ul的蒸餾水，用玻璃棒攪拌，配制成均勻的孢子懸浮液，用球計(jì)數(shù)板記錄孢子數(shù)目。</p><p><b>　　2 結(jié)果與分析</b></p><p>　　2.1 單劑抑制率的測(cè)定</p><p>　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)記錄的菌落直徑數(shù)據(jù)繪制表格

22、，運(yùn)用數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)分析，對(duì)于高粱葉枯2號(hào)菌株，50%異菌脲抑制率范圍為82.3%-48.3%，其次為55%烯酰·福美雙，抑制率范圍為71.3%-42.2%，接下來(lái)是50%多菌靈，3%中生菌素，而抑制率最低的是50%嘧菌酯；其中，50%異菌脲500倍液的抑制率最高達(dá)82.3%，其抑制效果最好，50%異菌脲1000倍液和55%烯酰·福美雙1600倍液的抑制效果僅次之，50%嘧菌酯400倍液的抑制效果最差，僅達(dá)17%左右

23、。</p><p>　　表1 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯2號(hào)菌株菌落生長(zhǎng)平均速率及抑制</p><p>　　對(duì)于高粱葉枯4號(hào)菌株，50%異菌脲抑制率范圍為68.1%-45.6%，其次為55%烯酰·福美雙，抑制率范圍為67.5%-42.1%，接下來(lái)是50%多菌靈，3%中生菌素，其中，50%異菌脲500倍液的抑制率最高，其抑制效果最好，55%烯酰·福美雙1000倍液和1200

24、倍液的抑制效果僅次之；而50%嘧菌酯低倍液下對(duì)于該菌種的生長(zhǎng)具有增效作用，高倍液下僅具有微弱的抑制作用，效果不太明顯。</p><p>　　表1 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯4號(hào)菌株菌落生長(zhǎng)平均速率及抑制率比較</p><p>　　2.2 孢子抑制率及其顯著性分析</p><p>　　根據(jù)試驗(yàn)記錄的孢子數(shù)量進(jìn)行相對(duì)抑制率的分析和顯著水平分析，對(duì)于2號(hào)菌種，處于0.05

25、的顯著水平下，50%異菌脲顯著水平較其他殺菌劑高，最高的是50%異菌脲500倍液，孢子抑制效果應(yīng)是最好的；其次為50%異菌脲1500倍液，50%異菌脲2000倍液；顯著水平最低的為3%中生菌1200倍液，55%福美雙和50%多菌靈差異顯著性均處于中間同一水平。處于0.01的顯著水平下，最高的仍是50%異菌脲500倍液，孢子抑制效果是最好的；其次為50%異菌脲1000倍液，50%異菌脲1500倍液，50%異菌脲2000倍液；55%福美雙和

26、50%多菌靈差異顯著性均處于中間同一水平。</p><p>　　表3 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯2號(hào)菌株孢子抑制率顯著性差異比較</p><p>　　對(duì)于4號(hào)菌種，處于0.01和0.05顯著水平下的顯著性差異基本相同，50%異菌脲顯著水平較其他殺菌劑高，最高的是50%異菌脲500倍液，其孢子抑制效果為最佳；顯著水平最低的為50%嘧菌酯，其抑制效果不僅小，反而低倍液下右微弱的促進(jìn)效果；而3%中

27、生菌素，55%福美雙和50%多菌靈差異顯著性之間沒(méi)有大的差別。</p><p>　　表4 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯4號(hào)菌株孢子抑制率顯著性差異比較</p><p>　　2.3 毒力回歸方程的計(jì)算</p><p>　　最后對(duì)5種殺菌劑進(jìn)行毒力回歸方程的計(jì)算，對(duì)于高粱葉枯2號(hào)菌株，五種殺菌劑的EC50高低排列為:50%異菌脲可濕性粉劑<50%多菌靈可濕性粉劑&l

28、t;55%烯酰·福美雙水分散粒劑<50%嘧菌酯可濕性粉劑<3%中生菌素可濕性粉劑，50%異菌脲最靈敏，因此抑菌效果最好，而3%中生菌素EC50很大，且r值是負(fù)值，濃度與抑制率表現(xiàn)負(fù)相關(guān)，其抑菌效果最差。</p><p>　　表5 五種殺菌劑對(duì)高粱葉枯2號(hào)菌株的毒力回歸方程</p><p>　　對(duì)于高粱葉枯4號(hào)菌株，50%異菌脲可濕性粉劑的EC50為7.47E-02，表

29、現(xiàn)為最靈敏，抑菌效果最好，而50%嘧菌酯可濕性粉劑的EC50非常，抑菌效果表現(xiàn)為最差。</p><p>　　表6 五種殺菌劑對(duì)高粱葉枯4號(hào)菌株的毒力回歸方程</p><p><b>　　3 結(jié)論與討論</b></p><p>　　本文選用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中用來(lái)防治真菌病害常用的5種殺菌劑對(duì)高粱葉枯病進(jìn)行室內(nèi)的藥劑篩選和毒力測(cè)定，這5種殺菌劑對(duì)于鏈格孢

30、的病害都具有很好的防治作用，并且具有不同程度的抑制作用，通過(guò)選取不同梯度的藥劑用于試驗(yàn)，計(jì)算菌絲的生長(zhǎng)抑制率和孢子抑制率，最終結(jié)合毒力回歸方程，結(jié)果初步顯示50%異菌脲可濕性粉劑對(duì)于該病菌的防治效果表現(xiàn)最好，尤其是在400-100倍液之間，其防治效果最高。另外，55%烯酰·福美雙水分散粒劑和50%多菌靈對(duì)于高粱葉枯病的防治也有一定的效果；3%中生菌素的防治效果微乎其微，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中起不到什么大的防治作用；而50%嘧菌酯在這幾個(gè)

31、方法中得出的結(jié)果均是對(duì)病害的發(fā)生有促進(jìn)作用，因此在大田防治高粱葉枯病害時(shí)，盡量不要用此藥劑。</p><p>　　目前高粱上的病害主要以高粱大斑病和黑穗病為害最為嚴(yán)重，在農(nóng)業(yè)防治中目前還沒(méi)有特效的藥劑，一般使用的化學(xué)藥劑多為光譜性殺菌劑或是一些新型生物源藥劑。本文最終篩選出的藥劑異菌脲屬于低毒類內(nèi)吸性殺菌劑，對(duì)于蔬菜水果上的霜霉病，葉斑病都有很好的防治效果，另外，異菌脲對(duì)于玉米交鏈格孢葉枯病的防治效果也比較好，與

32、高粱細(xì)極鏈格孢葉枯病很相似，張希福教授曾對(duì)玉米葉枯病做過(guò)相關(guān)的試驗(yàn)，其結(jié)果表示退菌特、撲海因、代森錳鋅、異菌脲等對(duì)病菌分生孢子萌發(fā)有較強(qiáng)的抑制作用【6】 ，因此對(duì)于退菌特、撲海因、代森錳鋅是否同樣適用于高粱葉枯病還有待于下一步的試驗(yàn)。</p><p>　　雖然此試驗(yàn)結(jié)果表明50%異菌脲是防治高粱葉枯病的最佳藥劑，但是此試驗(yàn)屬于室內(nèi)的藥劑篩選，于田間試驗(yàn)相比，由于試驗(yàn)條件和時(shí)間的限制，對(duì)于外界的自然因素和環(huán)境因素等

33、都沒(méi)有嚴(yán)格的控制，化學(xué)藥劑室內(nèi)抑菌活性和田間防治效果有較大的相關(guān)性【7】， 但田間病害的發(fā)生和流行是多種因素綜合影響的結(jié)果【8】， 因此，田間試驗(yàn)結(jié)果是否與室內(nèi)試驗(yàn)效果一致，還有待依賴多點(diǎn)重復(fù)的田間試驗(yàn)結(jié)果來(lái)確定， 本試驗(yàn)結(jié)果只是為田間病害防治選藥提供參考。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]曹玉佩.高粱病蟲(chóng)害的防治技巧[J].農(nóng)

34、藥市場(chǎng)信息.2011(20)</p><p>　　[2]成慧娟.嚴(yán)福忠.馬尚耀.王立新.葛占宇.王巖.影響高粱種子出苗率下降的原因及預(yù)防措施[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技.2011(04)</p><p>　　[3]楊冠美.鄭永利.吳華新.吳降星.章初龍.林福呈.9種殺菌劑對(duì)蕓薹生鏈格孢菌毒力的測(cè)定.《浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)》.浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所.2011(3)</p><p>

35、　　[4]邱星海.古藺縣高粱主要病蟲(chóng)害及防治技術(shù)[J].四川農(nóng)業(yè)科技.2011(08)</p><p>　　[5]周德慶.平板劃線法分離微生物純種的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)[J].遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院.1981(7),1-2</p><p>　　[6]張希福.張定法.高山松.河南省玉米細(xì)交鏈孢菌葉枯病的初步研究.玉米鏈格孢菌葉枯病發(fā)生及綜合防治技術(shù).《植物保護(hù)》.1996年03期</p><

36、;p>　　[7]林曉民.胡公洛.侯文邦.周麗鴻.豫西地區(qū)小麥雪霉葉枯病的初步研究[J].河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)學(xué)版).1991(03)</p><p>　　[8]蔣軍喜.戴兆基.唐自文.5種殺菌劑對(duì)梨輪紋病的毒力測(cè)定和田間藥效試驗(yàn)[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2010.(04):0710-0713</p><p><b>　　致 謝</b></p>&

37、lt;p>　　本篇論從題目的選擇到實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)的處理都得到了趙艷琴老師的耐心指導(dǎo)。悉心的幫我捋請(qǐng)論文思路，對(duì)我的論文批改給與了無(wú)微不至的關(guān)懷，使論文得以順利完成。趙艷琴老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕虒W(xué)作風(fēng)讓我頗感敬意。特此機(jī)會(huì)，在這里對(duì)趙艷琴老師表示衷心的感謝。</p><p>　　然后，感謝這四年來(lái)，給我們代課的安瑞軍老師、趙艷琴老師、張寧老師、張麗娟老師、石凱老師、于秀英老師、董永義老師，是你們細(xì)心的傳教讓我們?cè)谇髮W(xué)