天津中醫(yī)藥大學本科生學位論文-2010-資源版

1、<p>　　天津中醫(yī)藥大學本科畢業(yè)論文</p><p>　　不同產區(qū)甘草質量比較研究</p><p>　　The Comparative Study on the Quality of Several Kinds of </p><p>　　Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</p><p>　　in Dif

2、ferent Producing Regions</p><p>　　學 院 中藥學院 </p><p>　　專 業(yè) 中藥學（中藥資源與開發(fā)方向） </p><p>　　學生姓名 尹業(yè)菠 </p><p>　　學 號 201014022066

3、 </p><p>　　指導教師 元英群 </p><p><b>　　天津中醫(yī)藥大學</b></p><p><b>　　2014年 05月</b></p><p>　　天津中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明</p><p>　　本

4、人鄭重聲明：所呈交的學位論文是本人在導師指導下獨立進行的研究工作和取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用和致謝之處外，論文中不包含其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫的研究成果。也不包含獲得天津中醫(yī)藥大學或其他教育機構的學位、學歷使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。本人完全意識到該聲明的法律后果，并由本人承擔相應責任。</p><p>　　學位論文作者簽名：

5、 日期： 年 月 日</p><p>　　學位論文版權使用授權書</p><p>　　本學位論文作者完全了解天津中醫(yī)藥大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，特授權天津中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印

6、件和電子版。</p><p>　　學位論文作者簽名： 導師簽名：</p><p>　　日期： 年 月 日 日期： 年 月 日</p><p><b>　　目錄</b></p><p>　　中文摘

7、要………………………………………………………………………………………1</p><p>　　ABSTRACT………………………………………………………………………………………2</p><p>　　緒言…………………………………………………………………………………………………………3</p><p>　　論文正文………………………………………………………………………

8、………………5</p><p><b>　　1.材料和方法5</b></p><p><b>　　1.1材料5</b></p><p><b>　　1.2方法6</b></p><p><b>　　2.實驗材料6</b></p>&l

9、t;p><b>　　3.實驗方法6</b></p><p>　　3.1 甘草酸、甘草苷含量測定7</p><p><b>　　3.2聚類分析7</b></p><p>　　3.3 有機氯農藥殘留測定8</p><p>　　3.4重金屬及有害元素含量測定9</p><

10、;p>　　4.統(tǒng)計學處理11</p><p><b>　　5.結果11</b></p><p>　　5.1 甘草酸、甘草苷含量測定11</p><p>　　5.2 聚類分析12</p><p>　　5.3有機氯類農藥殘留測定14</p><p>　　5.4重金屬及有害元素測定14

11、</p><p><b>　　6.討論15</b></p><p><b>　　7.結論16</b></p><p><b>　　綜述19</b></p><p>　　甘草質量研究現狀19</p><p><b>　　譯文26<

12、/b></p><p>　　高血壓異常原因26</p><p><b>　　致謝33</b></p><p><b>　　中文摘要</b></p><p>　　目的：對目前不同產區(qū)的甘草的質量進行比較研究。方法：采用2010版《中國藥典》的色譜條件與方法,用高效液相色譜法，以甘草酸、甘草苷

13、為評價指標，對不同產區(qū)的甘草進行結果測定、分析。并用所得的高效液相色譜圖做了聚類分析，此外，還包括用原子吸收光譜（AAS）測重金屬及有害元素和氣相色譜法（GC-ECD）測有機磷類農藥殘留。結果：高效液相色譜圖，原子吸收分光光度法測，農藥殘留和重金屬含量測定均已取得預期結果。結論：以產區(qū)的環(huán)境綜合機制（即地域特征）做為甘草的質量評價及控制的參考依據是可行的。有利于生產企業(yè)對不同產區(qū)的原藥材的購進和生產，以有效利于如通脈養(yǎng)心丸等藥品質量保證

14、。</p><p>　　關鍵詞: 質量評價；高效液相色譜法；有機氯類農藥殘留測定；重金屬測定</p><p><b>　　ABSTRACT</b></p><p>　　Objective:The essay aims at making a comparative study on the quality of several kinds o

15、f glycyrrhizae radix et rhizoma in different producing regions at present.Methods:Adopting the conditions and methods used in Version 2010 Chinese Pharmacopoeia ,utilizing HPLC,taking glycyrrhizic acid and liquiritin as

16、an evaluation target, to examine and analyze the glycyrrhizae radix et rhizoma in different regions.And utilizing the results from HPLC for clustering analysis,besides,including the determinat</p><p>　　KEY W

17、ORDS: Quality evaluating;HPLC;Determination of organochlorine pesticide residues;Determination of heavy metal content</p><p><b>　　緒言</b></p><p>　　甘草，為豆科植物甘草屬多年生草本植物，首載于《神農本草經》，并有國老、

18、靈通譽稱。在中醫(yī)處方中離不開甘草，俗稱“十方九草”，并被稱為“百草之王”，也是世界自然基金會全球14個重點保護物種之一。甘草具有耐寒、耐熱、耐旱、抗鹽堿等優(yōu)良適應特性，生命力旺盛，為干旱、半干旱地區(qū)的重要作物。藥用為其地下根莖部分，2010版中國藥典規(guī)定其來源為豆科(Leguminosae)植物甘草屬（Glycyrrhiza L.）甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.(又稱烏拉爾甘草)、脹果甘草Glycyrrhi

19、za inflate Bat.或光果甘草（又名歐甘草）Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖[1]。為常用及大宗出口中藥。其性平，味甘。歸心、肺、脾、胃經。具有清熱解毒、止咳祛痰、緩急止痛、補脾益氣、調和諸藥的功效。甘草，作為一種常用中藥，已被人們接受和使用，通過對國內外的學者在不同的領域對其進行了研究，在了解足夠多的文獻資料后，其主要化學成分有四類：三萜類、黃酮類、生物堿類和多糖類。其中三萜類有甘草酸、24-羥基甘草

20、次酸等；黃酮類成分有甘草黃酮、異甘草黃酮、甘草素、</p><p>　　全世界甘草屬植物29種6變種，中國分布14種2變種，其中有烏拉爾甘草G. uralensis Fisch.、光果甘草G. glabra L.、脹果甘草G.ihflata Bat.、無腺毛甘草G. eglandulosa X. Y. Li.,蜜腺甘草G .glabra L. vai. glandulosa X. Y. L.及變種、疏小葉甘草G

21、.glabra L. vai. laxifoliolata X. Y. Li及變種、黃甘草G.eurycarpa P. C. Li.、石河子甘草G. shiheziensis X. Y. Li.、粗毛甘草G. aspera Pall.、平臥甘草G. prostrata X.Y. Li.、大葉甘草G. macrophylla X. Y. Li.,圓果甘草G. squamulosa Franch.、刺果甘草G. pallidiflora M

22、axim. ,云南甘草G. yunnanesis Cheng f. et L. K. Tai ex P.C.Li.,2010年版《中國藥典》收錄前3種。[2]</p><p>　　內蒙古和新疆自治區(qū)是甘草適宜和重點分布區(qū)域，其產量約占全國的一半以上。甘草是新疆荒漠區(qū)最主要的植被物種之一，分布面積廣，貯藏量大。新疆的82個縣市分布有9種甘草[3]。新疆野生光果甘草資源僅零星分布。[4]甘肅省有包括有烏拉爾甘草、黃甘

23、草、脹果甘草、光果甘草等4種，主要以烏拉爾甘草、黃甘草為主；脹果甘草除在安西零星分布外，其他地區(qū)幾乎沒有分布；而光果甘草資源已基本絕跡[5]。</p><p>　　本實驗中，從天津中新藥業(yè)集團公司藥材公司處獲得共12個甘草代表不同產地樣品，并且均有藥材公司的副主任藥師王樹全部長鑒定為烏拉爾甘草G. uralensis Fisch.。隨后，各個樣品中選擇適當的甘草樣。對各個樣選擇適當量，藥材處理，粉碎，過篩,得到細

24、粉，然后分袋裝好，并做標記，記錄。本實驗所用樣品覆蓋三個重要產地，具有代表性。用甘草酸，甘草苷含量，聚類分析，有機氯農藥殘留測定和重金屬及有害元素測定等“一測多評”方法，，來比較不同產區(qū)的甘草的質量差異。有利于生產企業(yè)對采購甘草原材料的內控質量標準的改進，保證藥品的質量安全有效。</p><p><b>　　論文正文</b></p><p><b>　　1.

25、材料和方法</b></p><p><b>　　1.1材料</b></p><p>　　1.1.1（甘草酸、甘草苷含量測定）</p><p>　　島津LC-2010液相色譜儀,配有AOC20i自動進樣器，ECD檢測器；</p><p>　　色譜柱為EQYUTY-1701，0.25×30m 。LC-2

26、010色譜工作站數據處理儀</p><p>　　KQ-250TDB超聲波振蕩器</p><p>　　甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為優(yōu)級純</p><p>　　甘草酸單銨鹽對照品、甘草苷對照品，購自中國藥品生物制品鑒定所（批號：110731-201116，111610-201106，質量分數大于98%)</p><p>　　1.1.2（聚類分

27、析）</p><p>　　TGL-16G離心機（上海安亭科學儀器廠）；AS20500A型超聲波清洗機。</p><p>　　甘草酸銨對照品購于中國藥品生物制品檢定所，甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素對照品均購買國家規(guī)定的檢定所</p><p>　　1.1.3（有機氯類農藥殘留測定）</p><p>　　島津GC-2014氣相色譜儀，配有AO

28、C-20i自動進樣器，NPD檢測器；色譜柱為EQYUTY-1701（0.25mm×30m） 。LC-2014色譜工作站數據處理儀</p><p>　　二氯甲烷（農殘級）批號：50438；</p><p>　　丙酮、石油醚、（60℃-90℃）分析純，農殘級；無水硫酸鈉 分析純；硫酸 優(yōu)級純；水為去離子水（MilliQ凈化）</p><p>　　六六六（BHC

29、）、滴滴涕（DDT）及五氯硝基苯（PNCB）(0.05mg/ml，國家標準物質研究中心)。</p><p>　　1.1.4（重金屬及有害元素測定）</p><p>　　微波消解儀MARS-5, 熱電M6型原子吸收分光光度計(AAS);熱電V9P0氫化物發(fā)生系統(tǒng)。</p><p>　　硝酸BV-Ш級，水為石英蒸餾器蒸餾過的超純水；硼氫化鈉、高錳酸鉀、碘化鉀、抗壞血酸均

30、為分析純；鹽酸、硫酸為優(yōu)級純。</p><p>　　鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標準品溶液（濃度均為1000mg·L-1，國家標準物質研究中心）。</p><p><b>　　1.2方法</b></p><p>　　均參照2010版《中國藥典》規(guī)定測定方法進行。</p><p><b>　　2.實驗材料&

31、lt;/b></p><p>　　實驗所用的甘草，均于60℃干燥4h后，粉碎，得到粗粉。本實驗中所用的甘草藥材性狀如表示。</p><p>　　表1 實驗中甘草藥材基本形狀</p><p><b>　　3.實驗方法</b></p><p>　　3.1 甘草酸、甘草苷含量測定</p><p>

32、;　　3.1.1對照品的制備</p><p>　　取甘草苷、甘草酸銨對品適量，精密稱定，制成含0.1mg/ml的溶液，為對照品溶液。取10μl，進樣入高效液相色譜儀，記錄色譜圖和保留時間</p><p>　　3.1.2供試品制備</p><p>　　稱取過四號篩的甘草中粉，0.4g，精密稱定，置于100ml具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱質量，超聲處理0.5

33、h，取出放冷，補足重量，搖勻，取上清液離心（10000r/min），即可。</p><p>　　3.1.2 實驗條件</p><p>　　以甘草酸、甘草苷為質量評價指標，綜合比較不同產地甘草的品質，其中對照品溶液和供試品溶液的制備、色譜條件及測定方法均嚴格依據2010版《中國藥典》規(guī)定的條件和方法，以保證分析結果的可評價性和準確性。</p><p>　　色譜條件：

34、分析柱：Luna C18（250mm×4.60mm，5μm）；流動相：乙腈-0.2mol/L醋酸鹽緩沖溶液（0.2mol/L醋酸銨-3%冰醋酸）梯度洗脫60min。0~12min從12：88→22：78，12~25min從22：78→25：75，25~40min從25：75→40：60，40~60min從40：60→15：48，45~60min保持15：85不變；體積流量：1.0ml/min；檢測波長：276nm；柱溫：30℃

35、；進樣量：10μl；理論塔板數以甘草苷計算，不低于5000。</p><p><b>　　3.2聚類分析</b></p><p><b>　　3.2.1實驗條件</b></p><p>　　3.2.1.1流動相選擇</p><p>　　選用C18色譜柱作為分析柱，乙腈-0.2mol/L的錯酸鹽緩沖溶

36、液流動相系統(tǒng)</p><p>　　3.2.1.2檢測波長</p><p>　　根據試驗的需要，分別選擇了甘草酸、甘草苷和甘草素、異甘草苷和異甘草素，最大吸收波長250、276、372作為指紋圖譜的檢測波長。</p><p>　　3.2.1.3色譜條件分析柱：Luna C18（250mm×4.60mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2 mol/L醋酸鹽緩沖溶

37、液（0.2mol/L醋酸銨-3%冰醋酸）梯度洗脫60min。0~12min從12：88→22：78，12~25min從22：78→25：75，25~40min從25：75→40：60，40~60min從40：60→15：48，45~60min保持15：85不變；體積流量：1.0ml/min；檢測波長：276nm；柱溫：30℃；進樣量：10μl；理論塔板數以甘草苷計算，不低于5000。</p><p>　　3.2.

38、1.4取各供標準品，供試品各10μL，進樣，記錄色譜圖，即得。</p><p>　　3.3 有機氯農藥殘留測定</p><p><b>　　3.3.1實驗條件</b></p><p>　　為2010版《中國藥典》一部附錄ⅨQ，附錄57。</p><p>　　色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗</p><p>

39、;　　彈性石英毛細管柱（30×0.25×0.25μm）DB-17MS，氮磷檢測器（NPD)，進樣溫度220℃，檢測溫度300℃，不分流進樣。</p><p>　　程序升溫：初始120℃，每分鐘10℃升至200℃，每分鐘5升至240℃，保持2分鐘，每分鐘20升至270℃度，保持0.5分鐘。理論板數按敵敵畏峰面積計算不低于6000，兩個相鄰色譜的分離度大于1.5。</p><

40、p>　　3.3.2 標準曲線</p><p>　　混合標準品儲備液的制備：分別精密稱取六六六（BHC）（α-六六六，β-六六六，γ-六六六，δ-六六六）、滴滴涕（DDT）（pp'-DDE、pp'-DDD、op'-DDT、pp'-DDT)及五氯硝基苯（PCNB）1ml，置于同一50ml量瓶中，用石油醚（60~90℃）稀釋至刻度，搖勻，作為混合標準品貯備溶液（濃度為1μg/ml）

41、。分別精密量取標注貯備液（濃度1ug/ml）適量，用石油醚（60~90℃）稀釋制成1ml含250、100、50、10、5、1ng的溶液。</p><p>　　3.3.3 測定方法</p><p>　　精密量取各濃度標準品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，測定，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標。根據樣品中待測成分的峰面積選擇不同的濃度范圍（至少4個濃度點），繪制出標準曲線。α-六六六，β-六六六，

42、γ-六六六，δ-六六六和pp’-DDE的線性回歸方程如下：</p><p>　　Y=6.416×103X-5.679×103,R2=0.9997</p><p>　　Y=4.153×103X+2.464×103,R2=1.000</p><p>　　Y=6.204×103X-3.421×103,R2=0.9

43、998 </p><p>　　Y=5.069×103X-1.927×103,R2=0.9999</p><p>　　Y=5.768×103X+3.364×103,R2=0.9997</p><p>　　線性范圍均為1~500ng·ml-1</p><p>　　3.3.4供試品配制</p&

44、gt;<p>　　取碎粉 ，過四號篩，量取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱重，超聲處理30min，放冷，補重，再加氯化鈉6g及二氯甲烷30ml，稱重，超聲處理15min，用二氯甲烷補重，靜置使分層，將有機相轉入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具賽錐形瓶中，反復操作2次，使石油醚溶解并定容至5ml，加硫酸1ml，振搖1min，離心（3000轉/分）10分鐘，精密量取上清液

45、2mL置具刻度的濃縮瓶中。連接旋轉蒸發(fā)儀，40℃下將其濃縮至適量，然后精密稀釋至1ml，取上清液，加水1次洗滌，水液棄去，取上清液作為供試品溶液，即得。同法制備試劑空白對照溶液。</p><p>　　3.4重金屬及有害元素含量測定</p><p><b>　　3.4.1標準試液</b></p><p>　　鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標準品溶液，由

46、國家標準物質研究中心提供。</p><p>　　3.4.2標準曲線的制備</p><p>　　為操作方便，可將各單元素標準溶液用2%硝酸稀釋成一定濃度的標準貯備液，于低溫保存，臨用前，取此貯備液，按要求稀釋并制備標準曲線。</p><p>　　Pb的標準曲線分別精密量取鉛標準儲備液 (lμg/ml)適量，用2%溶液稀釋制成每lml含鉛 0.5、20、40、60、8

47、0ng的溶液。</p><p>　　Cd 的標準曲線分別精密量取鎘標準儲備液(0.4ug/ml)適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每lml含鎘0、0.8、2.0、4.0、6.0、8.0ng的溶液。</p><p>　　Cu的標準曲線分別精密量取銅標準儲備液(0.1ug/ml)適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每lml含銅0、0.05、0.2、0.4、0.6、0.8μg的溶液。</p>

48、<p>　　As的標準曲線分別精密量取銅標準儲備液(0.1ug/ml)適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每lml含砷0、5、10、20、30、40ng的溶液，分別精密量取10ml，加25%碘化鉀溶液（臨時配制）1ml，搖勻，加10%抗壞血酸溶液（臨時配制）1ml，搖勻，用鹽酸溶液（20→100）稀釋至25ml，搖勻，即得。</p><p>　　Hg的標準曲線分別精密量取汞標準儲備液(0.1ug/ml)，

49、0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，置于50ml量瓶中，加4%的硫酸溶液40ml，5%高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5%鹽酸羥胺溶液，至顯紫紅色恰消失，用4%硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。</p><p>　　結果鉛、鎘、銅、砷、汞標準曲線方程分別為：</p><p>　　Y=-9×10-5X2+5.47×10-3+0.0251,R2=0.9990&l

50、t;/p><p>　　Y=-4.088×10-3X2+ 0.0786X0.0147,R2=0.9974</p><p>　　Y=1.070×10-3X2+0.01664×X-6×10-4,R2=0.9997</p><p>　　Y=-3.0×10-5X2+4.74×10-3 X+6.8×10-3,R2

51、=0.9997</p><p>　　Y=1.6×10-5X2+2.97×10-3 X-1.0×10-3,R2=0.9997</p><p>　　線性范圍分別為5~80ng/ml，0.8~8.0ng/ml， 0.05~0.8ug/ml，5~40ng/ml, </p><p>　　0.1~0.9ug/ml。</p><p

52、>　　3.4.3供試品溶液及供試品溶液及空白對照溶液的制備</p><p>　　精密稱取待測樣品0.5g，分別置于消解罐中，加硝酸5ml，按操作規(guī)定安裝好裝置，按下述程序消解：</p><p>　　以50%功率，在3min內自室溫加熱至100℃，持續(xù)5min；</p><p>　　以100%功率，3min內自100℃加熱至180℃，保持14min。消解結束后，

53、冷卻至罐內溫度低于70℃，緩緩放氣，取出內罐，置加熱板上，于125℃加熱，使NO2蒸汽揮盡，并持續(xù)濃縮至2~3ml，放冷，加4%硫酸溶液5~6ml，5%高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5%鹽酸羥胺液至紫紅色恰好消失，用4%硫酸溶液稀釋至10ml，搖勻，即得。同法同時制備試劑空白溶液。</p><p><b>　　3.4.4測定法</b></p><p>　　Pb 測

54、定法：Pb的測定采用石墨爐原子吸收法，檢測波長283.3nm，其他檢測參數可根據儀器具體情況加以優(yōu)化調查；</p><p>　　Cd 測定法：Cd的測定采用石墨爐原子吸收法，檢測波長228.8nm；</p><p>　　Cu 測定法：Cu的測定采用火焰原子吸收法；</p><p>　　As 測定法：As的測定采用氫化物發(fā)生-原子吸收法。吸收管溫度為800~900℃，

55、檢測波長為193.7nm；</p><p>　　Hg 測定法：Hg的測定采用冷蒸汽-原子吸收法，氮氣為載氣，檢測波長為253.6nm。</p><p><b>　　4.統(tǒng)計學處理</b></p><p>　　4.1甘草酸甘草苷含量測定</p><p>　　用島津2010高效液相色譜工作站，生成結果。</p>

56、<p><b>　　4.2聚類分析</b></p><p>　　為了消不同批次藥材含水量和稱樣量不同對色譜峰面積的影響，因此將峰面積換算成每克干燥品的峰面積。為了消除個指標變化幅度不同對聚類分析結果的影響，聚類分析之前，對數據進行了數據的標準化處理，即把每批樣品的峰面積數據標準化為均值為0、方差為1的數據。采用的是SPSS19軟件下的Classify函數下的Hierarchica

57、l cluster方法處理標準化后的特征峰面積。公式：</p><p>　　其中：xk表示每批樣品中的第k個峰的峰面積；表示12批樣品第k個峰的峰面積總和的平均值；sk表示12個批樣品第k個峰的峰面積的方差。</p><p><b>　　5.結果</b></p><p>　　5.1 甘草酸、甘草苷含量測定</p><p>

58、;　　以干燥品計算樣品中甘草酸、甘草苷的百分含量，如表2。</p><p>　　表2 不同產地甘草中甘草酸、甘草苷百分含量的比較</p><p><b>　　5.2 聚類分析</b></p><p>　　表3.1 12批藥品每克干燥品指標成分峰面積（A）及標準化結果</p><p>　　表3.2 聚類步驟表<

59、/p><p>　　圖3 聚類分析樹狀圖</p><p>　　聚類分析結果顯示，以甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素5種活性成分為指標，對12批樣品HPLC數量化特征進行系統(tǒng)聚類分析。計算機結果辨識表明，5、6、7、11聚為一類，除11號為甘肅產，其余均為新疆所產；1、2、3、4聚為一類；新疆8和甘肅11聚為一類；9和12、10成一類，均為甘肅產。</p><p&g

60、t;　　5.3有機氯類農藥殘留測定</p><p>　　表4 甘草甘草有機氯類農藥殘留量檢測結果 單位（μg/kg）</p><p>　　5.4重金屬及有害元素測定</p><p>　　表5 甘草重金屬及有害元素檢測結果</p><p><b>　　6.討論</b></p><p>　　從表2

61、中可以到處，按2010版《中國藥典》對甘草中甘草酸、甘草苷含量要求（本品按干燥品計算，所含甘草酸≥2.0%，甘草苷≥0.50%），除其中的新疆產樣品中甘草苷的較低外，樣品符合要求；此外，甘肅地區(qū)的樣品有效成分含量整體較高；內蒙古地區(qū)次之。由此可以得出，不同產區(qū)的地理位置、氣候特點、土壤特性等環(huán)境綜合機制對甘草的有效成分的影響極為明顯。此外，對比內蒙古和新疆的甘草樣品，及近年來對野生甘草甘草酸、甘草苷含量的相關報道[6～13]（其中，內蒙

62、古甘草酸約為2.44~5.82%，甘草苷含量[13]約為2.3%；新疆甘草甘草酸含量約為6.81%，甘草苷含量約0.23%；黑龍江肇州甘草中甘草酸含量約為8.74%；山東東營甘草甘草苷含量為0.74%），說明甘肅產地甘草的有效成分含量相對較高。</p><p>　　聚類分析結果顯示，以甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素5種活性成分為指標，對12批樣品HPLC數量化特征進行的系統(tǒng)聚類分析。三大產區(qū)的甘草差異

63、較小，考慮到地域特征因素，因此，說明雖然有環(huán)境因素影響，但仍是符合《中國藥典》規(guī)定的藥用要求。</p><p>　　藥用植物長期在自然環(huán)境生長過程中，期間由于其自身蓄積或受環(huán)境污染等因素，可能存在有重金屬或有害元素鉛、鉻、砷、汞、銻、鎘、銅、錫、鈹、鉍等，其中鉛、鎘、砷、汞對人體危害最大，銅為人體必須元素，但是過量，也會有害人體健康。</p><p>　　有機氯類農藥以其高效、廉價的特點，

64、曾經在世界范圍內被廣泛使用，但是目前已被世界上多數國家所禁用。其在自然環(huán)境中的半衰期大約為20年，可隨大氣和水體環(huán)境，污染到各個生態(tài)群，并在生物體內蓄積。通過本實驗對12批不同產地的甘草測試分析結果顯示，重金屬與有害元素遠低于2010版《中國藥典》一部規(guī)定的限度。農藥殘留測試結果顯示，樣品除一個樣檢出微量滴滴涕（DDT），其他樣未檢出滴滴涕（總DDT）和五氯硝基苯（PNCB），各樣品均殘留微量六六六（總BHC），說明樣品遠低于《中國藥典

65、》規(guī)定的限量。這表明，從重金屬和農藥殘留量標準上，個產地甘草均是可以安全使用的。</p><p><b>　　7.結論</b></p><p>　　可以看到，不同產區(qū)，包括內蒙古、新疆、甘肅的甘草，從各自的不同方面顯示出各地生產的甘草有明顯的地域差異，在實際生產中，應當注意到環(huán)境綜合機制（即地域特征）作為甘草質量控制和評價的科學依據。</p><p

66、>　　本實驗通過對甘草的指標成分（甘草酸、甘草苷）以及以HPLC圖譜所得的其他三個成分（甘草素，異甘草素異甘草苷）做聚類分析，并對齊重金屬及有害元素和有機氯農藥殘留進行了測定，以便對不同產區(qū)的甘草進行全面的質量比較研究。</p><p>　　對結果的分析中，可以看到：</p><p>　　甘草酸、甘草苷含量結果顯示未檢出，說明按照《中國藥典》規(guī)定，三大產的</p>&l

67、t;p>　　甘草都是符合藥用的；</p><p>　　聚類分析顯示，甘肅，內蒙產的部分的聚為一類，新疆的自成一類；</p><p>　　重金屬及有害元素含量檢測顯示，遠低于2010版《中國藥典》規(guī)定的限度；</p><p>　　農藥殘留測定結果顯示，有機磷類農藥殘留項下，各產區(qū)地的甘草都符合標準。</p><p>　　由以上結果，多方面

68、比較 內蒙古的甘草品質較好，質量教穩(wěn)定。此外，甘肅產甘草，無論是有效成分的積累和重金屬含量，都是較高的；新疆甘草則是有效成分含量次之，重金屬含量較其他產區(qū)較低；而內蒙古甘草則含量總體都是較穩(wěn)定的，重金屬含量較其他兩產區(qū)，居中。</p><p>　　由此，藥品企業(yè)在原藥材的購進和生產上，各產區(qū)的都可以選擇。從有效成分成分含量上考慮，應當以甘肅甘草為宜，內蒙古產其次，最后是新疆產甘草；從藥品安全性考慮，以新疆產甘草為

69、優(yōu)，其次是甘肅產甘草，最后是內蒙古甘草。綜合藥品質量和安全性評價考慮，以及成本效益考慮，應以內蒙古甘草為首選，其次是甘肅產甘草，最后為新疆甘草。</p><p>　　此外，通過對不同產區(qū)甘草質量的比較研究，HPLC法測甘草酸和甘草苷的質量控制，聚類分析，有機氯農藥殘留量測定，重金屬及有害元素含量的檢測等“一測多評”方法技術，是中藥特點指標質量評價的新模式，顯示出對中藥質量控制的可行性，科學性和指導性。對企業(yè)的生產

70、及質量控制都有極為重要的指示作用。本實驗很好的體現了這一點。</p><p>　　從實際情況出發(fā)，考慮到甘草的種植范圍廣泛，本實驗的甘草樣品量較少，不足以概括其他產區(qū)（如黑龍江，山東等地）。因此，本實驗需要再進行更廣泛地收集甘草樣品，以助于對甘草的質量評價。</p><p>　　本實驗的結論，有利于生產企業(yè)制定藥品的內控標準。在選擇藥材購進方面，有指導意義。對企業(yè)的生產有建設性作用，本實驗

71、可以繼續(xù)做，以完善不同數據。</p><p><b>　　參考文獻：</b></p><p>　　[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：2010.80~81.</p><p>　　[2]劉洋洋,劉春生,曾斌芳,范冰舵,李朋收,徐暾海,劉銅華. 甘草種質資源研究進展[J]. 中草藥,2013,24:3593-3598.&

72、lt;/p><p>　　[3]李學禹. 中國甘草屬 (Glycyrrhiza L. ) 植物種質資源[A] // 第二屆中國甘草學術研討會暨第二屆新疆植物資源開發(fā)、利用與保護學術研討會論文摘要集 [C]. 石河子: 中國植物學會, 2004.</p><p>　　[4]張繼,姚健,丁蘭,郭守軍,楊永利. 甘草的利用研究進展[J]. 草原與草坪,2000,02:12-17.</p>

73、<p>　　[5]李碩,李成義,楊扶德,王明偉,侯嘉. 甘肅不同產地野生烏拉爾甘草的質量比較研究[A]. 中華中醫(yī)藥學會中藥鑒定分會.中華中醫(yī)藥學會第十屆中藥鑒定學術會議暨WHO中藥材鑒定方法和技術研討會論文集[C].中華中醫(yī)藥學會中藥鑒定分會:,2010:4. </p><p>　　[6]王其灝,裴雅群,蔣挺大,李榮春,都靜瑩. 甘草酸的提取、分離和純化[J]. 醫(yī)藥工業(yè),1987,11:481-4

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77、雜志,2010,04:425-427.</p><p><b>　　綜述 </b></p><p><b>　　甘草質量研究現狀</b></p><p>　　【摘要】甘草主要分部在新疆和內蒙古，其分布區(qū)域廣泛，形態(tài)變異幅度大。種質資源的遺傳多樣性也越豐富。本文從種質資源方面，重金屬農藥殘留，聚類分析方面三方面對近些年來對甘

78、草的質量研究做一綜述，以便為含甘草藥劑的生產的企業(yè)的藥材采購提供內控參考，保證藥劑質量，讓患者服用安心。</p><p>　　【關鍵詞】甘草；不同產區(qū)；質量研究；種質資源；重金屬；農藥殘留；聚類分析</p><p>　　甘草又名國老、靈通、甜草、棒草，為豆科(Leguminosae)植物甘草屬（Glycyrrhiza L.）甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.(又稱

79、烏拉爾甘草)、脹果甘草Glycyrrhiza inflate Bat.或光果甘草（又名歐甘草）Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖[1]。多在春秋二季采挖，除去須根，曬干。其性味甘平，歸心、肺、脾、胃經，具有補脾益氣、清熱解毒祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥的功效；主要用于脾胃虛弱、倦怠乏力、癰腫瘡毒、緩解藥物毒性和烈性。甘草首載于《神農本草經》，列為上品。《名醫(yī)別錄》：“溫中下氣，煩滿，短氣，傷臟咳嗽，止咳，通經脈，利

80、血氣，解百藥毒。”在傳統(tǒng)中醫(yī)藥中被稱為“百草之王”，是世界自然基金會全球14個重點保護植物之一?，F代研究表面，甘草主要活性成分是三萜皂苷和黃酮類化合物，具有抗?jié)?、抗炎、解痙、抗氧化、抗病毒、抗癌、抗抑郁、保肝、祛痰和增強記憶力等多種功效。[2]</p><p>　　甘草最早產于山西、陜西、山東及東北3省，現其野生資源已絕跡或甚少，這是與歷代帝王建都中原有關。目前，寧夏、甘肅、青海、內蒙古、新疆和陜西榆林地區(qū)作為

81、甘草大宗商品的供貨地，新疆甘草的蘊藏量較多、種質資源最豐富[3]、近幾年甘草作為藥材、食物及煙草添加劑的市場需求量猛增，結果野生資源過度被采挖，致使甘草藥材產量和質量急劇下降，與此同時，加之甘草本生的固沙特性，所以加速了北方荒漠化的擴展，嚴重影響了生態(tài)環(huán)境。考慮到甘草的栽培育種還未形成規(guī)范、科學的生產體系，因此，甘草資源的合理開發(fā)利用、種質控制評價是一項重要課題[4]。從質量上研究甘草的資源特性，有利于藥企采購優(yōu)質甘草，進而藥材來源上內

82、控甘草的質量問題，便于生產含甘草為輔藥的質量過硬的藥，如天津中新藥業(yè)的通脈養(yǎng)心丸等，保證臨床療效，讓患者安心。</p><p>　　甘草的種質資源的研究[2]</p><p>　　甘草種質資源的多樣性為甘草及其近緣植物變異總和，主要包括物種多樣性和遺傳多樣性2個層次。其外在表現為不同區(qū)域、不同居群、不同植株的植物形態(tài)以及藥材的有效成分的差異。</p><p>　　1

83、.1甘草屬物種多樣性</p><p>　　全世界甘草屬植物29種6變種，中國分布14種2變種，其中有烏拉爾甘草G. uralensis Fisch.、光果甘草G. glabra L.、脹果甘草G.ihflata Bat.、無腺毛甘草G. eglandulosa X. Y. Li.,蜜腺甘草G .glabra L. vai. glandulosa X. Y. L.及變種、疏小葉甘草G .glabra L. vai.

84、 laxifoliolata X. Y. Li及變種、黃甘草G.eurycarpa P. C. Li.、石河子甘草G. shiheziensis X. Y. Li.、粗毛甘草G. aspera Pall.、平臥甘草G. prostrata X.Y. Li.、大葉甘草G. macrophylla X. Y. Li.,圓果甘草G. squamulosa Franch.、刺果甘草G. pallidiflora Maxim. ,云南甘草G. y

85、unnanesis Cheng f. et L. K. Tai ex P.C.Li.,2010年版《中國藥典》收錄前3種。[2]</p><p>　　內蒙古和新疆自治區(qū)是甘草適宜和重點分布區(qū)域，其產量約占全國的一半以上。甘草是新疆荒漠區(qū)最主要的植被物種之一，分布面積光，貯藏量大。新疆的82個縣市分布有9種甘草[3]，為烏拉爾甘草，無腺毛甘草，光果甘草（兩變種，密腺甘草和疏小葉甘草），脹果甘草，黃甘草，石河子甘草，

86、粗毛甘草，平臥甘草，大葉甘草。新疆野生光果甘草資源僅零星分布。[4]甘肅省有包括有烏拉爾甘草、黃甘草、脹果甘草、光果甘草等4種，主要以烏拉爾甘草、黃甘草為主；脹果甘草除在安西零星分布外，其他地區(qū)幾乎沒有分布；而光果甘草資源已基本絕跡[5]。</p><p>　　1.2甘草生物形態(tài)的多樣性</p><p>　　甘草分布區(qū)域越廣泛，其形態(tài)變異幅度越大。無論生長年限、土壤類型和生態(tài)環(huán)境如何，在莖

87、皮顏色，莖附屬物（刺毛）和葉片邊緣形狀等形態(tài)特征均存在明顯的差異與變化。[6]楊全等人[7]以人工栽培甘草為系統(tǒng)研究對象，來劃分甘草的形態(tài)變異類型。馬春英等[8]發(fā)現白花和紫花萼類型甘草的甘草酸、甘草苷和異甘草素量均高于普通白花類型。此外，甘草的農藝性狀和品質性狀間也存在不同的相關關系。[9]</p><p>　　對甘草重金屬農藥殘留的研究</p><p>　　重金屬能直接或通過蓄積對人體

88、產生不理影響。隨著人們對中藥安全意識的提高，重金屬問題已經成為當今國內外學術界關注的熱點。中國藥典規(guī)定了甘草屬及有害元素、有機氯農藥殘留量的限度。有學者對不同產地的甘草進行了重金屬，農藥殘留分析。</p><p>　　李偉等[10]對內蒙古的道地主產地土壤和甘草重金屬做過含量分析，發(fā)現土壤中As、Hg和Cu相互之間均呈極顯著負相關性，其他重金屬之間均無顯著相關性，證明土壤中這三種重金屬之間存在著一種平衡和制約的關

89、系。對甘草的重金屬含量進行相關性分析，發(fā)現甘草中重金屬As、Cd和Pb相互之間，均呈極顯著正相關性，其他之間沒有顯著相關性。對土壤和甘草中的重金屬含量進行相關性分析，發(fā)現土壤中的重金屬Pb與甘草中As、Cd和Pb呈現顯著正相關性.</p><p>　　王坤等[11,12]以2005年版中國藥典一部規(guī)定的方法對寧夏栽培和野生甘草的重金屬及有害元素、有機氯農藥殘留進行了比較分析，結果表明寧夏9批甘草重金屬及有害元素遠

90、低于符合中國藥典2005年版一部規(guī)定。農藥殘留檢測結果除一批檢出及微量DDT（0.7ug·kg-1）外，其他均未檢出滴滴涕（總DDT）和五氯硝基苯（PCNB），各樣品均有殘留微量的六六六（總BHC），但遠低于中國藥典2005年版一部規(guī)定的限度。</p><p>　　甘草的聚類分析方面的研究</p><p>　　在中藥分析 ，植物的內在化學性質，是從分子水平上研究植物類群及其親緣關

91、系，增加分類依據，以檢驗、修正原有的分類系統(tǒng)，來測定高的、自然的分類群。[13]中紅外光譜技術適用于各種形態(tài)的樣品，一般不需要做特殊處理，樣品用量少，信息量大，指紋性強,對樣品無污染。[14]莫文龍等[15]借助于無損紅外光譜的指紋性，用模式識別的方法中的聚類分析對譜圖差異較小的同種藥材甘草的產區(qū)進行了聚類。從結果上看，采用紅外光譜聚類分析能很好地將同一地理位置和氣候條件的樣品歸類在一起，同時也表明采用紅外數據進行聚類時，完全能體現出聚

92、類算法側重于揭示具有最相近關系的優(yōu)點來。</p><p>　　李成義等[16]以西北地區(qū)商品甘草建立HPLC指紋圖譜并進行聚類分析。對16批商品甘草色譜數據中10個共有特征峰的相對峰面積值，使用SPSS19軟件進行系統(tǒng)聚類分析，選用類間平均法作為聚類方法，采用平方歐式距離作為測度方法。圖譜結果顯示，由于商品等級的不同，指標成分甘草酸和甘草苷的峰面積以及其他共有峰峰面積不同，它們之間的相似度存在一定的差異。<

93、/p><p>　　王躍飛等[17]以內蒙古伊克昭盟杭錦旗為主的甘草藥材中所含活性成分為分析，選擇適宜HPLC條件，建立甘草的指紋圖譜分析方法。以甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素5個活性成分峰面積的標準化結果對17批樣品進行聚類分析。研究結果表明：杭錦旗伊泰集團西北溝基地甘草人工栽培品中甘草酸及甘草黃銅的量略高于杭錦旗其他地區(qū)甘草；烏蘭察布市察右后旗烏拉哈鄉(xiāng)產甘草與內蒙古和林縣新店子鄉(xiāng)產甘草的甘草酸及甘草黃銅

94、的量高于其他地區(qū)產甘草，活性成分的量差異較大，提示甘草活性成分的積累與產地有一定的相關性。把杭錦旗3大甘草種植基地(西北溝基地、吉爾成郎圖基地、賽格臺基地)的大部分樣品均聚為一類，表明杭錦旗的3大甘草種植基地所產甘草藥材品質較好，質量較穩(wěn)定。</p><p>　　此外，現代醫(yī)學已經證明，微量元素與人體的健康密切關系?，F代已經發(fā)現鐵、鎂、鋅、銅硒、錳等微量元素都參與了生命體內的許多重要生理過程，與生命體內的許多疾病

95、的發(fā)生密切相關。所以中醫(yī)藥微量元素的研究顯得極為重要。微量元素的分布及含量的差異是道地藥材的奧秘之一，種質是影響道地藥材中微量元素的主要因素。</p><p>　　曹紅翠等[18]對西北地區(qū)12個不同產地的幾個主要種類的甘草，以微量元素含量為指標，應用主成分分析法，結合SPSS13.0軟件對甘草的微量元素進行聚類分析。篩選出特征根累計貢獻率達83.260%的3個主成分，對選出的品種進行系統(tǒng)聚類分析 ，在離差水平和

96、的水平上將其劃分為甘肅酒泉、甘肅金塔、新疆博樂3大類群。結果表明，甘草中的9種微量元素，除鉛外，都是對人體有一定生理功能的必需元素。其中鈣、鎂、鐵含量較高，其次是錳、鋅、銅含量也較豐富。</p><p>　　馬存花等[19]用火焰原子吸收光譜法（FAAS）測新疆15個甘草樣品中13種中無機元素的含量，并做了聚類分析及其指紋圖譜特征研究。數據采用SPSS16.0軟件包中的Classify函數下的Hierarchic

97、al cluster方法處理。由結果可知，新疆甘草中含有豐富的無機元素，其中常見元素Ca、Mg、K含量較高，微量元素Cr、Cu、Co、Ni、Mo含量較低，而微量元素Se只有在一個樣中檢出。聚類分析結果顯示，在要求相似度不高（即距離大時），南北疆甘草樣品不存在明顯的區(qū)域差異。而曲線分析顯示，12種無機元素（除去Se）的含量呈現相似的峰形，認為這一共性可以作為新疆甘草的專屬性區(qū)別于其他中藥材。考慮到15個樣的曲線并不完全重合，說明每個樣中各

98、無機元素的含量存在差異，與聚類分析分析結果是一致的。</p><p><b>　　小結[20]</b></p><p>　　甘草作為世界各國廣泛使用的藥用植物之一，從甘草中提取和精制的工業(yè)產品主要有甘膏、甘草霜、甘草酸粉、甘草甜味素等。可以預料，隨著市場經濟的建立，以及對甘草開發(fā)利用范圍的擴大，甘草的需求量和出口量將急劇增長。進入21世紀，甘草在國際市場更成為搶手的緊

99、缺商品，其身價越來越高。目前，世界上能出口甘草的國家只有伊朗、伊拉克、前蘇聯(lián)、阿富汗、土耳其和中國。兩伊戰(zhàn)爭以來，我國甘草更受國際關注，日本每年進口甘草的半數以上來自我國;在美國進口甘草中，中國甘草曾占到98 %。然而，對甘草無計劃的采挖，使甘草資源遭到嚴重破壞。目前國內對甘草原料需求量已達50-70萬噸。隨著甘草市場需求的發(fā)展，今后甘草品種選育會注重品種的多樣化，同時，考慮到甘草細胞培養(yǎng)技術大量生產甘草的主要成分甘草酸未成功，隨著制藥

100、行業(yè)需求變化，甘草酸、甘草黃酮量高的品種可能會受到種植戶偏好。這會給以甘草為原藥材做要藥劑的企業(yè)帶來一定的改革更新。</p><p><b>　　綜述參考文獻：</b></p><p>　　[1]中國藥典 [S].二部.2010.</p><p>　　[2] 劉洋洋,劉春生,曾斌芳,范冰舵,李朋收,徐暾海,劉銅華. 甘草種質資源研究進展[J].

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108、　[18]曹紅翠,吳啟勛. 中藥甘草中微量元素的主成分分析和系統(tǒng)聚類分析[J]. 甘肅聯(lián)合大學學報(自然科學版),2010,02:61-63</p><p>　　[19]馬存花,代斌,徐彩霞,肖芙蓉,周娜,吳建寧. 新疆甘草中無機元素的聚類分析及其指紋特征研究[J]. 安徽農業(yè)科學,2010,14:7299-7300,7335.</p><p>　　[20] 王照蘭,杜建材,于林清,巴達拉

109、呼,史智. 甘草的利用價值、研究現狀及存在的問題[J]. 中國草地,2002,01:74-77.</p><p><b>　　譯文</b></p><p><b>　　高血壓異常原因</b></p><p>　　【摘要】我們以一位有高血壓兼低血鉀癥的女性為觀察對象。鑒別診斷會涵蓋原發(fā)型醛固酮過多癥, 利尿藥或者萊參特（la