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文檔簡(jiǎn)介
1、<p> 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊
2、啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊,人們對(duì)畜產(chǎn)品安全的要求越來(lái)越高.為禁止非法使用萊克多巴胺藥物飼喂動(dòng)物,確保動(dòng)物產(chǎn)品安全,保障人體健康和促進(jìn)畜牧業(yè)持續(xù)健康發(fā)展,根據(jù)國(guó)家有關(guān)法律和標(biāo)準(zhǔn),制定本...啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊
3、啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊</p><p><b> 前 言</b></p><p> 隨著社會(huì)和人民生活水平的提高,人們對(duì)畜產(chǎn)品安全的要求越來(lái)越高。為禁止非法使用萊克多巴胺藥物飼喂動(dòng)物,確保動(dòng)物產(chǎn)品安全,保障人體健康和促進(jìn)畜牧業(yè)持續(xù)健康發(fā)展,
4、根據(jù)國(guó)家有關(guān)法律和標(biāo)準(zhǔn),制定本標(biāo)準(zhǔn)。</p><p> 本標(biāo)準(zhǔn)由福建省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。</p><p> 本標(biāo)準(zhǔn)由福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。</p><p> 本標(biāo)準(zhǔn)由福建省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、福州市獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)起草。</p><p> 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: </p><p> 動(dòng)物尿樣中萊克多巴胺的測(cè)
5、定</p><p><b> 范圍</b></p><p> 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以酶聯(lián)免疫(ELISA)法檢測(cè)動(dòng)物尿液中萊克多巴胺殘留量的方法。</p><p> 本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼養(yǎng)場(chǎng)動(dòng)物和調(diào)運(yùn)、交易及屠宰前動(dòng)物尿液中萊克多巴胺殘留量的測(cè)定。</p><p><b> 規(guī)范性引用文件</b><
6、/p><p> 下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。</p><p> GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法</p><p><b> 試樣制備</b></p>&
7、lt;p> 采集的尿樣應(yīng)保存于4℃左右的冰箱中。尿樣如有混濁,應(yīng)經(jīng)離心處理。</p><p><b> 原理</b></p><p> 本方法是酶聯(lián)免疫法中的競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定法,其主要原理是:微孔先用萊克多巴胺多抗包被,標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的萊克多巴胺和酶標(biāo)記的萊克多巴胺競(jìng)爭(zhēng)性地與吸附在微孔內(nèi)的萊克多巴胺多抗相結(jié)合,未結(jié)合的酶標(biāo)記物被洗滌去除后,只剩下與微孔內(nèi)抗體相結(jié)合
8、的酶標(biāo)記物,其再與加入的酶底物相結(jié)合,酶底物在酶作用下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,吸光度的高低與樣品中萊克多巴胺的含量成反比。</p><p><b> 試劑和材料</b></p><p> 萊克多巴胺酶聯(lián)免疫試劑盒或類似產(chǎn)品。</p><p> 水為去離子水,符合GB/T 6682二級(jí)水的規(guī)定。</p><p><b&g
9、t; 儀器與設(shè)備</b></p><p> 微孔板酶標(biāo)儀(帶450nm濾光片)。</p><p><b> 微量振蕩器。</b></p><p><b> 離心機(jī)。</b></p><p> 微量加樣器及配套吸頭:10-200μL不同的微量加樣器, 50-100μL多通道加樣器
10、 。</p><p><b> 冰箱。</b></p><p> 測(cè)定步驟(不同品牌的試劑盒可能略有差別,具體可根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書略作調(diào)整)。</p><p><b> 樣品處理</b></p><p> 7.1.1清澈尿樣直接用于檢測(cè)直接加入微孔進(jìn)行ELISA測(cè)定。</p>
11、<p> 7.1.2尿液樣品比較混濁時(shí)2000g離心5min或過(guò)濾,用上清液檢測(cè)。</p><p> 試劑準(zhǔn)備(所有試劑應(yīng)貯存于2-6℃,不得冷凍,并在使用前將所有試劑恢復(fù)到室溫)。 </p><p> 7.2.1萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)溶液:已備用或根據(jù)實(shí)際需要按試劑盒說(shuō)明配置相應(yīng)濃度的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。</p><p> 7.2.2酶標(biāo)記物:在凍干粉
12、瓶中精確加入12mL酶標(biāo)物溶解液,正反搖晃,充分溶解(最好在使用前至少4小時(shí)配置)。</p><p> 7.2.3洗滌液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋</p><p><b> 7.3測(cè)試程序</b></p><p> 7.3.1根據(jù)所測(cè)定樣品及標(biāo)準(zhǔn)數(shù),計(jì)算出所需微孔條數(shù),將微孔條插入微孔架,標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)孔的平行重復(fù),記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣
13、品的位置。</p><p> 7.3.2加入50μL的標(biāo)準(zhǔn)品和處理好的樣品到各自的微孔中,標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行重復(fù)。</p><p> 7.3.3在所有孔中加入100μL酶標(biāo)記物,輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板。在室溫下(20-25℃)孵育10分鐘。</p><p> 7.3.4倒出孔中的液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍干,再加入工作洗液300μL,再倒掉洗液,重復(fù)操作3遍以上
14、。最后用吸水紙拍干。</p><p> 7.3.5在所有孔中加入100μL顯色劑,充分混合并在室溫孵育10min。</p><p> 7.3.6在所有孔中加入50μL反應(yīng)終止液,混合后在450nm處10分鐘內(nèi)測(cè)量吸光度值。</p><p><b> 結(jié)果計(jì)算</b></p><p> 8.1計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的
15、平均吸光度值。</p><p> 8.2以空白(濃度為0的標(biāo)準(zhǔn)溶液)吸光度值為100%計(jì)算,計(jì)算出各標(biāo)準(zhǔn)和樣品的相對(duì)吸光度值。</p><p> 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值(或樣品)</p><p> 相對(duì)吸光度值(%) = ×100 </p><p><b> 空白
16、的吸光度值</b></p><p> 8.3用標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),450nmi波長(zhǎng)的吸光度值為縱坐標(biāo)在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,以待測(cè)樣品的相對(duì)吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出相應(yīng)樣品的濃度。</p><p> 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊
17、啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊隨著社會(huì)和人民生活水平的提高啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊
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