我國部分地區(qū)禾谷絲核菌的群體遺傳結(jié)構(gòu)分析及其定量檢測.pdf

1、由禾谷絲核菌(Rhizoctonia cerealis Vander Hoeven)引起的小麥紋枯病(sharpeyespot of wheat)是我國小麥種植區(qū)普遍發(fā)生、危害嚴(yán)重的一種土傳性真菌病害，每年都造成小麥的大量減產(chǎn)。因此，分析我國不同地區(qū)的禾谷絲核菌的群體遺傳多樣性，了解土壤中病原菌的動態(tài)變化，將為禾谷絲核菌的群體生物學(xué)和分子流行學(xué)研究奠定基礎(chǔ);并且有助于對田間病害的發(fā)生情況進(jìn)行早期診斷和動態(tài)監(jiān)測，為小麥紋枯病的防治提供理論

2、依據(jù)。
　　 本研究采用微衛(wèi)星標(biāo)記的方法研究禾谷絲核菌的群體遺傳結(jié)構(gòu)。根據(jù)禾谷絲核菌菌株R0301的轉(zhuǎn)錄組設(shè)計了6對SSR引物，對采自我國安徽省蚌埠市、山東省臨沂市、江蘇省姜堰市和河南省商丘市4個地區(qū)的禾谷絲核菌群體進(jìn)行群體遺傳研究。結(jié)果表明，這6個微衛(wèi)星位點(diǎn)的多態(tài)性較好，可用于禾谷絲核菌遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳關(guān)系等分析。Popgene軟件分析數(shù)據(jù)表明，6對引物在4個群體中共檢測到44個等位基因，平均每個座位上7.3個等位基

3、因，且等位基因的頻率分布并不均勻;4個群體的期望雜合度在0.514-0.533之間，平均為0.522，表明各群體的遺傳多樣性豐富;Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)檢測中表明，4個群體中分別都只有兩個位點(diǎn)處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，其他位點(diǎn)大多極顯著的偏離Hardy-Weinberg平衡，表現(xiàn)出顯著的雜合子缺失，群體內(nèi)可能存在不同程度的近交;F統(tǒng)計量研究結(jié)果表明，群體內(nèi)部和群體之間存在一定的遺傳分化，群體間的遺傳分化系數(shù)

4、Fst為0.042，表明群體間的遺傳分化程度低，只有4.2％的分化來自群體間，而95.8％的分化來自群體內(nèi)部。群體間的基因流Nm=5.75，表明群體間的基因交流頻繁;群體間的遺傳距離較近，遺傳一致度較高，表明群體之間的遺傳關(guān)系相近。
　　 由于小麥紋枯病的早期癥狀易和其它真菌病害的癥狀混淆，很難用肉眼觀察對其進(jìn)行鑒定;而在土壤中禾谷絲核菌只能以菌絲和菌核的形式存在，且生物量相對較低，因此需要建立一個快速、可信的檢測方法對土壤中的

5、禾谷絲核菌進(jìn)行鑒定和定量。本研究根據(jù)禾谷絲核菌的β-微管蛋白基因(β-tublin)的DNA序列設(shè)計了一對禾谷絲核菌的特異性引物RtubF4和RtubR4，采用熒光定量PCR的法來對土壤中的病原菌進(jìn)行鑒定和定量檢測。結(jié)果表明:根據(jù)禾谷絲核菌β-tublin基因設(shè)計的引物RtubF4和RtubR4的特異性良好，可作為禾谷絲核菌分子檢測的一個工具;建立了完整、穩(wěn)定的土壤中禾谷絲核菌的real-time PCR定量檢測體系，擴(kuò)增靈敏度檢測顯示