基于鐵皮石斛EST-SSR標(biāo)記開(kāi)發(fā)的蘭科植物遺傳多樣性分析.pdf

1、蘭科植物有著極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值,一直都深受人們的喜愛(ài),蘭花產(chǎn)業(yè)已成為國(guó)際花卉業(yè)的重要組成部分。我國(guó)蘭花資源中一些種不但具有很高的觀賞價(jià)值,而且具有極高的藥用價(jià)值。由于過(guò)度開(kāi)采,生境破壞而導(dǎo)致野生蘭花資源已瀕臨滅絕,因此對(duì)蘭科植物的研究和保護(hù)工作已刻不容緩。開(kāi)展對(duì)對(duì)蘭科植物的系統(tǒng)進(jìn)化研究,直接關(guān)系到對(duì)現(xiàn)有資源的有效評(píng)價(jià)和合理利用,也有利于優(yōu)質(zhì)新品種的培育,關(guān)乎整個(gè)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
　　 為了能在從分子水平對(duì)蘭科植物進(jìn)行較全面的系

2、統(tǒng)進(jìn)化研究,本研究首先對(duì)蘭科植物石斛屬中的代表種鐵皮石斛進(jìn)行SSR標(biāo)記的開(kāi)發(fā),將標(biāo)記用于石斛屬中驗(yàn)證其通用性和多態(tài)性,然后將石斛EST-SSR標(biāo)記擴(kuò)展到蘭科植物材料中,為蘭科植物的遺傳多樣性等相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 (1)本研究首先對(duì)杭州師范大學(xué)“浙江省藥用植物種質(zhì)改良與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”構(gòu)建的鐵皮石斛cDNA文庫(kù)進(jìn)行分析,對(duì)4075條EST序列進(jìn)行搜索,得到了含有838個(gè)SSR位點(diǎn)的706條有效EST序列,最終成功開(kāi)發(fā)11

3、0對(duì)EST-SSR引物。在所有EST序列中的SSR位點(diǎn)中,二、三核苷酸重復(fù)類型最多,分別為37.83％和42.96％,四核苷酸重復(fù)類型其次(12.53％);六核苷酸重復(fù)類型最少,僅占2.98％。
　　 (2)成功開(kāi)發(fā)的110對(duì)鐵皮石斛EST-SSR引物,位于108個(gè)EST序列上,其中99條序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索到了基因功能注釋。將110對(duì)引物用于在31種石斛屬植物,進(jìn)行了通用性及多態(tài)性分析,研究結(jié)果表明,石斛EST-S

4、SR在石斛屬通用性和多態(tài)性都很高,分別為47.93％和82.58％。
　　 (3)將本實(shí)驗(yàn)室前期開(kāi)發(fā)的金釵石斛EST-SSR與本研究開(kāi)發(fā)的鐵皮石斛EST-SSR用于蘭科植物的研究,選擇其中在石斛屬中通用性＞50％的引物,對(duì)蘭科的15個(gè)屬44個(gè)材料進(jìn)行通用性與多態(tài)性的分析,結(jié)果表明通用性偏低,為25.05％,多態(tài)性較好,為55.38％。;將其中有代表性的10對(duì)引物擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行測(cè)序,共獲得223條序列,對(duì)EST-SSR標(biāo)記在蘭科植物