基于分子標記的鐵皮石斛種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、鐵皮石斛是我國珍稀藥材,了解種質(zhì)資源遺傳多樣性,有助于選育優(yōu)良新品種、合理利用和保護種質(zhì)資源。采用SCoT和SSR標記技術,建立鐵皮石斛SCoT-PCR、SSR-PCR反應體系。分析鐵皮石斛遺傳多樣性,結(jié)果如下:
　　 1、通過正交試驗設計和單因素實驗相結(jié)合,建立鐵皮石斛SCoT-PCR最佳反應體系（20μL）:DNA模板30ng,Mg2+2.5mmol·L-1、dNTPs0.15mmol·L-1、Taq酶1.5U、引物0.4μ

2、mol-l·L-1。PCR擴增程序:94℃,5min;94℃,35s,51℃,35s,72℃,1.5min,35個循環(huán);72℃,10min,SCoT標記在32份鐵皮石斛材料的驗證中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性和可重復性。
　　 利用SCoT分子標記對鐵皮石斛個體和居群進行遺傳多樣性和聚類分析,從57條SCoT引物中篩選出28條引物,共擴增出385條帶,其中366條為多態(tài)性條帶,多態(tài)性比率(PPB)94.76％;17個居群的多態(tài)位點(PPL

3、)在28.83％～64.42％,平均為45.73％,聚類結(jié)果表明不同來源的鐵皮石斛聚在一起,但有例外,說明鐵皮石斛種質(zhì)具有豐富的遺傳多樣性。
　　 2、鐵皮石斛SSR-PCR最佳反應體系（20μL）:Mg2+1.5mmol·L-1、引物0.6μmol.L-1和dNIPs0.40mmol·L-1、TaqDNA聚合酶0.5U、模板DNA40ng;SSR-PCR擴增反應程序:95℃,Smin,95℃,35s,(41-58.1)℃,35

4、s,72℃,1.5min,35個循環(huán);72℃,10min;利用該反應體系對95份鐵皮石斛進行SSR-PCR擴增,擴增譜帶多態(tài)性豐富。
　　 利用SSR分子標記對鐵皮石斛個體和居群進行遺傳多樣性和聚類分析,從26個SSR引物中篩選出10對引物,共擴增出63條帶,其中61條為多態(tài)性條帶,多態(tài)性比率(PPB)97.00％;17個居群的多態(tài)位點(PPL)在11.11％～90.48％,平均為53.22％。聚類結(jié)果表明鐵皮石斛遺傳多態(tài)性豐富

5、,居群間遺傳差異較大。
　　 3、將SCoT和SSR標記相結(jié)合對17個居群的鐵皮石斛進行遺傳多樣性分析,結(jié)果表明鐵皮石斛遺傳多樣性主要分布于居群間,鐵皮石斛種質(zhì)的親緣關系與其地理緯度具有顯著的相關性。聚類結(jié)果表明,SCoT和SSR標記相結(jié)合能夠更明確了不同來源的鐵皮石斛種質(zhì)資源的親緣關系和地理緯度關系密切。更進一步證明了SCoT和SSR標記對鐵皮石斛遺傳多樣性、親緣關系分析的可靠性,為鐵皮石斛品種的選育、引種和推廣提供了可靠的理