鐵皮石斛組培條件的正交試驗(yàn)與基于SRAP分子標(biāo)記的遺傳多樣性研究.pdf

1、鐵皮石斛原球莖多次繼代培養(yǎng)后，分化能力減弱，運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)方法研究在6-BA，IBA，pH三個(gè)因素三水平下的L9(34)實(shí)驗(yàn)。得出鐵皮石斛原球莖在N6的培養(yǎng)基上最佳分化配方為6BA的濃度為2mg/L，IBA濃度為0.2mg/L，pH值為5.8。 嘗試用K+代替部分添加物，運(yùn)用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，研究不同培養(yǎng)基種類，瓊脂的含量，以及KCl濃度對于鐵皮石斛叢生苗生根的影響。結(jié)果證明，鐵皮石斛叢生苗在N6的培養(yǎng)基，KCl為2.5mol

2、/L，瓊脂的含量為4g/L，最有利于根的生長。 相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(sequence-related amplified polymorphism，SRAP)是一種新型的基于PCR的標(biāo)記系統(tǒng)，由美國加州大學(xué)蔬菜作物系Li與Quiros博士于2001年提出。具有簡便，穩(wěn)定，中等產(chǎn)率和容易得到選擇條帶序列的特點(diǎn)。 針對鐵皮石斛SRAP反應(yīng)的特點(diǎn)，參考有關(guān)文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)了引物，對鐵皮石斛SRAP反應(yīng)體系中各個(gè)主要影響因子進(jìn)行了優(yōu)化

3、和篩選，建立了標(biāo)記位點(diǎn)清晰、穩(wěn)定性強(qiáng)，重復(fù)性好的，可用于鐵皮石斛SRAP-PCR分析的最適反應(yīng)體系。 從設(shè)計(jì)的81對引物中，篩選多態(tài)性最好的兩對引物對鐵皮石斛的12個(gè)野生居群進(jìn)行SRAP擴(kuò)增。共獲得91個(gè)DNA片段，其中多態(tài)性片段79個(gè)，占總帶數(shù)的86.81％，并運(yùn)用POPGENE1.31和AMOVAversion1.55軟件分析了鐵皮石斛12個(gè)野生居群的SRAP分子指紋數(shù)據(jù)。結(jié)論為鐵皮石斛種群間的基因分化系數(shù)Gsl.為0.33