霍山石斛的分子鑒定及其遺傳多樣性評價.pdf

1、摘要摘要霍山石斛CDmdrobiumhuoshanerteseTangetCheng)為蘭科（Orchidaceae)石斛屬CD—Sw.)藥用植物，俗稱米斛，僅發(fā)現(xiàn)于安徽省大別山區(qū)。由于其具有較高的藥用價值，導(dǎo)致人們對其過度開釆，野生資源急劇減少。以其莖加工而成的名貴中藥材“霍斗”價格昂貴，達到710萬元kg。近年來，市場上霍山楓斗以次充好的現(xiàn)象屢現(xiàn)。因此，亟待需要對該物種的遺傳多樣性進行評價，尋找高效鑒別途徑，旨在為規(guī)范霍山石斛的市場

2、資源提供合理的科學(xué)依據(jù)。本文主要進行了以下三個方面的研究內(nèi)容：(1)探討了近源種石斛SSR標記在霍山石斛中的通用性，選用具通用性的球花石斛微衛(wèi)星標記初步研究霍山石斛野生資源的遺傳多樣性，檢測到霍山石斛的遺傳多樣性為0.661。(2)依據(jù)rDNAITS序列特異性位點，基于霍山石斛ITS1序列第96個堿基位點，ITS2區(qū)域第474個堿基位點設(shè)計特異性引物HSJB01S和HSJB01X。利用特異性引物對霍山石斛及其形態(tài)學(xué)相似的9種石斛進行分

3、子鑒別，當退火溫度調(diào)至66。C時，只有霍山石斛的模板DNA能被擴增出來，進而達到有效區(qū)分霍山石斛與其形態(tài)學(xué)相似的常見混淆種的目的。(3)基于SYBRGreenII染料的熒光定量PCR方法，以60種石斛材料的ITS序列比對結(jié)果為背景，設(shè)計并篩選出特異性最佳，同時擴增效率最高的兩對特異性引物HS_RT2、HS—RT6對霍山楓斗進行擴增，建立了一種快速而精準鑒定霍山石斛的方法。實驗結(jié)果顯示，引物HS—RT2檢測霍山石斛時，其Ct值約為14.

4、3，而其他種類的石斛顯示了更髙的Ct值，結(jié)果為33.570.74。弓丨物HS—RT6檢測霍山石斛時，其Ct值約為14.72，其他種類的石斛為33.310.69。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，兩者具有顯著性差異（P0.001)。通過本實驗的方法，克服了楓斗中高含量多糖對DNA擴增的影響，有效區(qū)別由霍山石斛D.huoshanense加工而成的霍斗及由其他石斛加工而成的楓斗。關(guān)鍵詞：霍山石斛，SSR，遺傳多樣性，分子鑒定，熒光定量PCRIAbstractco

5、ntentofpolysacidewhichwouldhavebadinflunceinDNAamplificationofDendrobiumspeciesasweelasestablishedanefficientwaytoidentify“Huodou“madefromD.huoshanensefromother“Fengdou“products.Keywds:DendrobiumhuoshanenseSSR，geneticdiv