霍山石斛（栽培）抗炎多糖的結(jié)構(gòu)鑒定及活性評(píng)價(jià).pdf

1、霍山石斛(Dendrobium huoshanense)是中國一種傳統(tǒng)的藥用植物，其莖部位可經(jīng)加工成為楓斗，是一種珍貴的補(bǔ)品。本文以栽培的霍山石斛莖部位為原料提取多糖，以小鼠Raw264.7巨噬細(xì)胞為模型評(píng)價(jià)多糖的抗炎活性，并對(duì)高活性組分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，對(duì)其抗炎信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行探討，以期為闡明霍山石斛多糖功能與結(jié)構(gòu)之間的聯(lián)系奠定基礎(chǔ)。
　　(1)以巨噬細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)NO水平為指標(biāo)，對(duì)霍山石斛不同成分進(jìn)行活性導(dǎo)向分離，經(jīng)脫脂、水提

2、醇沉、DE-52陰離子交換樹脂分離、乙醇分級(jí)，獲得抗炎活性不同的5種組分，其中以多糖組分cDHP-W1抗炎活性最佳。
　　(2)理化性質(zhì)分析表明，cDHP-W1是一相對(duì)分子質(zhì)量為24kDa、主要由Man和Glc按1.00∶8.21摩爾比所組成的均一多糖，其碳水化合物含量為97.79％，特性粘度（η）為0.7192，并含有4.3％乙?；?.4％的糖醛酸。高碘酸氧化、FT-IR、GC-MS及1D和2D NMR分析揭示，cDHP-W1

3、的主鏈由1，4-linked-Glcp、1，4-linked-Manp和1，4，6-linked-Glcp所組成，其支鏈為T-linked-Glcp。
　　(3)利用LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥模型，初步探討了cDHP-W1的抗炎活性及其作用機(jī)制。濃度梯度實(shí)驗(yàn)表明，cDHP-W1能夠劑量依賴地抑制LPS誘導(dǎo)的NO、PGE2、TNF-α和IL-1β等炎性介質(zhì)的分泌，當(dāng)濃度達(dá)到200μg/mL時(shí)，抑制效果最為顯著。LPS及cDHP-W1處

4、理時(shí)間實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)cDHP-W1預(yù)處理時(shí)間為1h、LPS處理時(shí)間為24h時(shí)，cDHP-W1對(duì)NO、PGE2、TNF-α和IL-1β分泌的抑制效果最佳。
　　RT-PCR分析表明，不同的LPS及cDHP-W1處理時(shí)間下，iNOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)量各不相同，當(dāng)cDHP-W1預(yù)處理時(shí)間為1h、LPS處理時(shí)間為12h時(shí)，cDHP-W1可顯著下調(diào)iNOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)。
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