類胡蘿卜素基因轉(zhuǎn)入玉米優(yōu)良自交系的研究.pdf

1、類胡蘿卜素是人體內(nèi)的重要的抗氧化物質(zhì)，也是人體內(nèi)的維生素A的前體，是人類必不可少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但人自身不能合成，必須從食物中攝取，人體如果缺乏類胡蘿卜素，會(huì)引發(fā)很多疾病。玉米作為主要的糧食作為之一，類胡蘿卜素含量非常低。在發(fā)達(dá)國(guó)家，由于膳食均衡，人類健康沒有受到影響，但在我國(guó)西部地區(qū)和很多非洲國(guó)家，人們以玉米為主食，且他們飲食單一，類胡蘿卜素?zé)o法得到合理的補(bǔ)充，造成這些地區(qū)人群的維生素A缺乏癥（VAD），因此應(yīng)用基因工程技術(shù)提高玉米中的類

2、胡蘿卜素含量具有非常重要的意義。本研究采用農(nóng)桿菌侵染方法，將類胡蘿卜素合成基因轉(zhuǎn)入到高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的玉米自交系中，我們選擇了玉米Ⅱ型愈傷和成熟胚作為外植體。
　　在以玉米Ⅱ型愈傷作外植體的遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中，對(duì)其遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了系統(tǒng)的優(yōu)化，以優(yōu)良玉米自交系天塔5母的幼胚為材料，誘導(dǎo)出Ⅱ型愈傷，用帶有質(zhì)粒pCAMBIA2300-LmLycB-Bar根癌農(nóng)桿菌C58侵染，對(duì)培養(yǎng)基和遺傳轉(zhuǎn)化因素進(jìn)行優(yōu)化。共培養(yǎng)3天，延遲培養(yǎng)7天，再轉(zhuǎn)入含PPT

3、的培養(yǎng)基上連續(xù)篩選3代，分化獲得再生植株。經(jīng)PCR和RT-PCR檢測(cè)確定獲得了2株陽(yáng)性植株，HPLC檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因玉米葉片總類胡蘿卜素含量為174.83μg/g，比未轉(zhuǎn)化的玉米提高了15.8％,轉(zhuǎn)基因玉米中β-胡蘿卜素的含量95.07μg/g，比未轉(zhuǎn)化的玉米顯著提高了60.2%。
　　本研究建立了新的玉米成熟胚的農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化體系，確定了除草劑PPT的篩選濃度，在T0代中我們得到了20個(gè)玉米轉(zhuǎn)基因系，將它們種下去之后，有4個(gè)轉(zhuǎn)基因系