鱖三種生長(zhǎng)抑素與兩種受體cDNA全長(zhǎng)克隆及組織表達(dá)分析.pdf

1、生長(zhǎng)抑素(somatostatin，SS)是脊椎動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的主要負(fù)調(diào)控因子之一,屬于多基因家族,它們通過(guò)與生長(zhǎng)抑素受體(somatostatin receptor，SSTR)結(jié)合,參與生長(zhǎng)激素-胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ(GH-IGF-Ⅰ)生長(zhǎng)軸的多水平調(diào)節(jié),從而介導(dǎo)生物體的生長(zhǎng)發(fā)育。本論文利用cDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE)克隆了鱖(Siniperca chuatsi)腦組織中3種生長(zhǎng)抑素前體(preprosomatostatin，PS

2、SⅠ、PSSⅡ和PSSⅢ) cDNA全長(zhǎng)序列。結(jié)果顯示,鱖 PSSⅠ cDNA全長(zhǎng)647 bp,包含開(kāi)放閱讀框(ORF)369 bp,共編碼122個(gè)氨基酸,前26個(gè)氨基酸為信號(hào)肽,C端 SS-14在脊椎動(dòng)物中非常保守;PSSⅡ cDNA全長(zhǎng)655 bp,開(kāi)放閱讀框387 bp,編碼128個(gè)氨基酸,前25個(gè)氨基酸為信號(hào)肽,C端帶有[Tyr7，Gly10]SS-14;PSSⅢ cDNA全長(zhǎng)823 bp,開(kāi)放閱讀框333 bp,共編碼110個(gè)

3、氨基酸,前21個(gè)氨基酸為信號(hào)肽,C端帶有[Pro2]SS-14。利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了鱖 PSS mRNA的組織表達(dá)特征,3種 PSS mRNA均在腦組織中表達(dá),PSSⅠ mRNA在其他組織中未見(jiàn)表達(dá),PSSⅡmRNA在食道和胃中大量表達(dá),PSSⅢ mRNA在腎和性腺中大量表達(dá)。推測(cè)3種 PSS除一致參與中樞神經(jīng)激素調(diào)控外,PSSⅡ還參與消化作用調(diào)控,PSSⅢ參與調(diào)控生殖作用。對(duì)腦組織原位雜交分析表明,PSSⅠ mRNA在下丘腦和延

4、腦中表達(dá),PSSⅡmRNA在下丘腦中表達(dá),PSSⅢ mRNA在下丘腦、視覺(jué)蓋、延腦和脊髓中均有表達(dá)。3種 PSS均在下丘腦表達(dá),進(jìn)一步表明它們可參與神經(jīng)內(nèi)分泌中心調(diào)節(jié)。在其他腦區(qū)的表達(dá)差異,推測(cè)不同生長(zhǎng)激素還參與其他神經(jīng)生理調(diào)控和發(fā)育調(diào)節(jié),兼有其他生物學(xué)效應(yīng)。
　　在獲得三種生長(zhǎng)抑素基因的基礎(chǔ)上,利用RACE技術(shù)進(jìn)一步克隆獲得了鱖腦中2種生長(zhǎng)抑素受體(SSTR2和SSTR3)cDNA全長(zhǎng)序列。鱖 SSTR2 cDNA全長(zhǎng)1820

5、bp,含開(kāi)放閱讀框1146 bp,共編碼382個(gè)氨基酸;SSTR3 cDNA全長(zhǎng)1874 bp,含開(kāi)放閱讀框1458 bp,共編碼486個(gè)氨基酸。SSTR由5個(gè)部分組成:N端區(qū)域、7個(gè)轉(zhuǎn)膜區(qū)(TMD)、3個(gè)細(xì)胞外袢(ECLs)、4個(gè)細(xì)胞內(nèi)袢(ICLs)和C末端區(qū)域。NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果顯示,鱖 SSTR2和SSTR3分別形成相對(duì)獨(dú)立的分支,兩者氨基酸序列相似度為51.2％,表明它們是由不同基因編碼而成。利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)

6、了 SSTR2和SSTR3 mRNA的組織表達(dá)特征,它們均在多種組織中廣泛表達(dá)。其中,SSTR2 mRNA在肝臟中表達(dá)量最高,其次是腦、脾臟、性腺和幽門垂,心臟、食道、胃、腸道中表達(dá)量較低。SSTR3 mRNA在胃中表達(dá)量最高,其次是腦、食道、腎和性腺,鰓和幽門垂中表達(dá)量較低。SSTR2和SSTR3 mRNA均在腦中表達(dá),與三種 PSS均在腦中表達(dá)一致,推測(cè)鱖 SS主要參與腦中的神經(jīng)和激素調(diào)控。SSTR2 mRNA在肝臟中表達(dá)量最高,S