華東地區(qū)Q型煙粉虱抗性監(jiān)測及抗性基在頻率檢測.pdf

1、煙粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是熱帶和亞熱帶地區(qū)危害最嚴重的害蟲之一,可通過直接刺吸寄主植物汁液以及傳播上百種植物病毒造成危害。煙粉虱是一個由多種生物型組成的復合種,不同生物型在寄主范圍、地理分布、抗藥性和傳毒能力等方面存在顯著差異,其中B型和Q型是目前研究最為廣泛深入的兩種生物型。長期以來,化學防治是控制煙粉虱的主要手段,然而,大量化學藥劑的使用已導致煙粉虱對包括有機磷類、氨基甲酸酯類、新煙堿類和昆蟲生長調節(jié)

2、劑在內的多種殺蟲劑產生抗藥性。本文對華東地區(qū)Q型煙粉虱田間種群進行了抗性監(jiān)測、殺蟲劑靶標基因克隆和序列分析以及抗性等位基因頻率檢測。此外,還檢測了Q型煙粉虱田間種群與新煙堿類殺蟲劑抗性相關的細胞色素P450基因CYP6CM1內含子單核苷酸多態(tài)性,并克隆和分析了CYP6CM1基因5'側翼序列。
　　 應用成蟲浸葉生測法研究了江蘇無錫、揚州、東臺和浙江杭州以及上海5個地區(qū)Q型煙粉虱田間種群對6種代表性殺蟲劑的抗性水平。結果表明,與相

3、對敏感種群相比,Q型煙粉虱田間種群已對氯氰菊酯、吡蟲啉和烯啶蟲胺產生了低到中等水平抗性,LC50分別達到570.41-2413.93 mg/L、44.48-653.51 mg/L和8.65-103.17 mg/L,對敵敵畏和丁硫克百威也較不敏感,LC50分別高達460.86-1066.99 mg/L和50.18-349.12 mg/L。對阿維菌素表現(xiàn)為極敏感,LC50僅為0.0006-0.02 mg/L。
　　 通過RCR擴增獲

4、得了華東地區(qū)Q型煙粉虱田間種群長度分別為287 bp和184bp的乙酰膽堿酯酶acel基因和鈉離子通道基因片斷。序列分析表明,華東地區(qū)Q型煙粉虱田間種群存在與有機磷抗性相關的乙酰膽堿酯酶F331W突變和與擬除蟲菊酯抗性相關的鈉離子通道L925I和T929V突變。
　　 通過PCR-RFLP技術檢測了華東地區(qū)不同年份和種群Q型煙粉虱田間種群與有機磷抗性相關的乙酰膽堿酯酶aoel基因F331W突變,發(fā)現(xiàn)F331W突變存在于所檢測的所

5、有煙粉虱種群個體中;利用PCR-RFLP和PASA技術分別檢測了與擬除蟲菊酯抗性相關的鈉離子通道IIS4-5結構域L925I和T929V突變,發(fā)現(xiàn)L925I和T929V突變頻率分別為0.394-0.633和0.559-0.904,并且T929V平均突變頻率(0.721)明顯高于L925I平均突變頻率(0.589),但L925I和T929V突變頻率與Q型煙粉虱對氯氰菊酯的抗性水平沒有相關性,表明存在其它代謝抗性機制。
　　 通過P

6、CR擴增獲得Q型煙粉虱揚州種群細胞色素P450基因CYP6CM1片段序列,包括63 bp的外顯子片段和826-829 bp的內含子片段。多重序列比對發(fā)現(xiàn),在內含子第195、230和242等3個堿基處存在與新煙堿類殺蟲劑抗性相關的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。進一步通過利用基因組步移技術獲得了長度為1226 bp的CYP6CM1基因5'側翼序列,利用NNPP在線分析軟件預測轉錄起始位點為位于起始密碼子上游57 bp處的堿基A,通過TFSEA