華東地區(qū)Q型煙粉虱對(duì)新煙堿類殺蟲劑的抗性監(jiān)測(cè)及其靶標(biāo)基因克隆.pdf

1、煙粉虱Bemisia tabaci（Gennadius）是一種世界性農(nóng)業(yè)害蟲，其中B型與Q型是危害程度最為嚴(yán)重的兩種生物型，相對(duì)于B型煙粉虱，Q型煙粉虱對(duì)殺蟲劑的耐受能力更強(qiáng)，且對(duì)包括有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類、新煙堿類和昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等大部分殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，其中尤以對(duì)新煙堿類殺蟲劑的抗性問題最為突出。本文對(duì)我國(guó)華東地區(qū)8個(gè)Q型煙粉虱田間種群對(duì)新煙堿類殺蟲劑（吡蟲啉、烯啶蟲胺、噻蟲嗪和呋蟲胺）和氟啶蟲胺腈抗藥性水平進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，

2、通過RT-PCR克隆了Q型煙粉虱煙堿型乙酰膽堿受體β1亞基基因全長(zhǎng)cDNA，并對(duì)Q型煙粉虱田間種群乙酰膽堿受體β1亞基是否存在抗性相關(guān)突變進(jìn)行了檢測(cè)。此外，運(yùn)用基因組步移技術(shù)克隆了Q型煙粉虱抗性相關(guān)細(xì)胞色素P450CYP4C64基因側(cè)翼區(qū)序列，并對(duì)B型和Q型煙粉虱CYP4C64基因5'側(cè)翼區(qū)序列多態(tài)性進(jìn)行了比對(duì)分析。
　　采用浸葉法對(duì)揚(yáng)州、江陰、東臺(tái)、和縣、上海、合肥、杭州和南昌8個(gè)地區(qū)的Q型煙粉虱田間種群對(duì)新煙堿類殺蟲劑的抗性水

3、平進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，與敏感種群相比，8個(gè)地區(qū)Q型煙粉虱田間種群對(duì)吡蟲啉和烯啶蟲胺產(chǎn)生低至中等水平抗性，抗性倍數(shù)分別為4.07-21.75倍和3.37-16.14倍。除了揚(yáng)州種群對(duì)噻蟲嗪產(chǎn)生高水平抗性(RF40.38)外，其他種群對(duì)噻蟲嗪產(chǎn)生低水平抗性，抗性倍數(shù)為3.50-8.58倍。8個(gè)地區(qū)的煙粉虱田間種群對(duì)呋蟲胺與氟啶蟲胺腈較敏感，其中南昌種群對(duì)呋蟲胺和氟啶蟲胺腈的敏感性最高（RF分別為0.5和0.41），表明呋蟲胺和氟啶蟲胺腈與

4、毗蟲啉、烯啶蟲胺和噻蟲嗪之間不存在交互抗性。
　　通過RT-PCR克隆了煙粉虱乙酰膽堿受體β1亞基基因1597bp全長(zhǎng)cDNA，編碼氨基酸序列與桃蚜Myzus persicae乙酰膽堿受體β1亞基的一致性為84.8％。對(duì)Q型煙粉虱田間種群乙酰膽堿受體β1亞基的序列分析發(fā)現(xiàn)，在8個(gè)地區(qū)煙粉虱田間種群中存在23個(gè)核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，導(dǎo)致編碼19個(gè)氨基酸發(fā)生替換。雖然在D環(huán)上對(duì)應(yīng)桃蚜對(duì)吡蟲啉抗性相關(guān)T81R突變的R78氨基酸沒有發(fā)生突變，

5、但在江陰種群中發(fā)現(xiàn)了位于D環(huán)的45個(gè)堿基的片段缺失，該缺失片段編碼的15個(gè)氨基酸包含了R78。
　　利用基因組步移方法獲得煙粉虱抗性相關(guān)細(xì)胞色素P450基因CYP4C64的5'和3'側(cè)翼基因組序列。利用CONSITE軟件對(duì)CYP4C645'側(cè)翼基因組序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，包括51個(gè)GATA-1、24個(gè)Ahr-ARNT、7個(gè)CREB、2個(gè)NRF-2和33個(gè)Broad-complex-4。對(duì)B型敏感種群和Q型田間種