B6楊花藥培養(yǎng)研究.pdf

1、B6楊是小黑楊雌株天然授粉而得,為雄株。B6楊繼承了小黑楊適應(yīng)性廣泛、速生、抗寒、耐旱、抗病蟲、樹干通直圓滿、材質(zhì)潔白等優(yōu)點,而且其生長速率比小黑楊提高20％以上。本實驗研究了溫度、光照、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、低溫處理、蔗糖濃度、培養(yǎng)容器對B6楊花藥再生植株的影響;利用流式細胞儀(PA)對花藥組培苗葉片進行倍性分析,同時對小黑楊SSR-PCR反應(yīng)技術(shù)體系進行優(yōu)化。
　　 主要實驗結(jié)果如下:
　　 1.組織培養(yǎng)方面的研究表明:溫度

2、和光照對小黑楊花藥愈傷誘導(dǎo)和不定芽誘導(dǎo)影響顯著。暗培養(yǎng)有利于愈傷組織的誘導(dǎo),光照有利于不定芽的分化;愈傷組織誘導(dǎo)和不定芽誘導(dǎo)最佳溫度為25℃。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS+2.0 mg·L-12,4-D+0.5 mg·L-1KT+30 g·L-1蔗糖,誘導(dǎo)率最高達到89.2％;誘導(dǎo)不定芽最佳培養(yǎng)基為:1/2MS+0.5 mg·L-1BA+0.05 mg·L-1NAA+20 g·L-1蔗糖,不定芽誘導(dǎo)率最高達85.4％。生根培養(yǎng)基為:

3、MH+0.2mg·L-1IBA+20g·L-1蔗糖,其誘導(dǎo)生根率達到100％。在其他條件相同的情況下不定芽的誘導(dǎo)率的趨勢是玻璃培養(yǎng)瓶中明顯高于塑料瓶的誘導(dǎo)率。
　　 2.流式細胞儀倍性分析表明:采用流式細胞儀對花藥培養(yǎng)植株進行鑒定發(fā)現(xiàn)花培植株分別為單倍體,二倍體,四倍體,二、三、四混倍體植株,單倍體為2.3％,四倍體5.7％,混倍體3.4％,二倍體88.5％占絕大多數(shù)。
　　 3.小黑楊B6 SSR反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果:2

4、0μL反應(yīng)體系:2.0μL10×buffer(MR2+ free),1.0μLdNTP(2.5 Mm each),0.2μL Taq酶(2.5 U/μL),2.0μL each引物。反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性3 min,循環(huán)一次:94℃變性30 s,50～58℃退火30 s,72℃延伸1 min,循環(huán)34次;最后72℃延伸5 min。對所選取得的5對引物進行篩選,篩選WPMS09這對引物帶型清晰,重復(fù)性好,穩(wěn)定性高。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳得